重組腺病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)的骨髓間充質(zhì)細(xì)胞導(dǎo)向的CNTF基因靶向性治療多發(fā)性硬化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、中山大學(xué)博士學(xué)位論文重組腺病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)的骨髓間充質(zhì)細(xì)胞導(dǎo)向的CNTF基因靶向性治療多發(fā)性硬化的實(shí)驗(yàn)研究姓名：陸正齊申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師：胡學(xué)強(qiáng)20070530中山大學(xué)博士學(xué)位論文重組腺病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)的骨髓問充質(zhì)細(xì)胞導(dǎo)向的CNTF基岡靶向性治療多發(fā)性硬化的實(shí)驗(yàn)研究第二部分重組腺病毒載體AdCNTFIRESGFP對MSC表達(dá)(一)目的CNTF的影響本課題欲觀察重組腺病毒載體AdCNTFIRESGFP對MSC表達(dá)CNTF的影響。()

2、材料和方法先體外培養(yǎng)MSCS細(xì)胞，用流氏細(xì)胞儀測定MHCl，CDl3CD44和MHC2，CD45，CD34，鑒定MSCS細(xì)胞。并分三組，第一組對MSCS進(jìn)行DIL染色，第二組將1X10(8)的AdGFP病毒轉(zhuǎn)染l10(6)MSCS，MOI為100：1(病毒活性單位：細(xì)胞)，第三組將1lO(8)AdCNTFIRESGFP轉(zhuǎn)染MSCSl10(6)，用流氏細(xì)胞儀測定AdGFP病毒轉(zhuǎn)染后的MSCS和AdCNTFIRESGFP轉(zhuǎn)染后的MSCS表達(dá)

3、的MHCl，CDl3CD44和MHC2，CD45，CD34情況，鑒定MSCS細(xì)胞的活性有無改變；再觀察AdGFP轉(zhuǎn)染的MSCS和AdCNTFIRESGFP轉(zhuǎn)染的MSCS的熒光情況，并計(jì)算轉(zhuǎn)染率，用CNTF的ELISA試劑盒測定三組上清液中CNTF的濃度，觀察三組CNTF分泌情況。結(jié)果采用SPSS130統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。用單因素方差分析p005差異有顯著性。(三)結(jié)果1MSCS表達(dá)MHCl，CDl3，CD44不表達(dá)MHC2，CD4

4、5，CD34。AdGFP轉(zhuǎn)染后的MSCS和AdCNTFIRESGFP轉(zhuǎn)染后的MSCS表達(dá)MHCl，CDl3，CD44不表達(dá)MHC2，CD45，CD34，證實(shí)MSCS的活性沒有改變。2DIL染色的MSCS在倒置熒光顯微鏡發(fā)出強(qiáng)的紅色熒光，發(fā)光率在99％左右。AdGFP轉(zhuǎn)染的MSCS因GFP發(fā)出強(qiáng)的綠色熒光。AdCNTFIRESGFP轉(zhuǎn)染的MSCS因GFP在CNTF后面，發(fā)出較AdGFP稍弱的綠色熒光。兩者的轉(zhuǎn)染率在90％左右。3ELISA