HLA-G慢病毒轉(zhuǎn)染誘導(dǎo)腎移植免疫耐受的大鼠和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景:人類(lèi)白細(xì)胞抗原(Ⅰ)類(lèi)分子HLA-G在體外實(shí)驗(yàn)中證實(shí)具有通過(guò)多種機(jī)制聯(lián)合作用致免疫耐受的特性，臨床上在器官移植術(shù)后患者病理標(biāo)本或者血清中HLA-G水平的升高與急性和慢性排斥的發(fā)生率的降低程度相關(guān)。國(guó)內(nèi)學(xué)者楊寧的研究表明，腺病毒HLA-G1轉(zhuǎn)染SD至Wistar大鼠受體存活時(shí)間明顯延長(zhǎng)。我們擬用慢病毒HLA-G轉(zhuǎn)染SD至Wistar大鼠保證持久而穩(wěn)定的表達(dá)HLA-G，測(cè)試作為干預(yù)因素對(duì)抗急性排斥的效果。既往的研究表明，靶細(xì)胞表達(dá)HL

2、A-G能夠通過(guò)與NK細(xì)胞上的抑制性受體的結(jié)合，抑制細(xì)胞毒性顆粒的靶向釋放，也能夠通過(guò)含HLA-G的細(xì)胞膜片轉(zhuǎn)移到NK細(xì)胞，使得暫時(shí)獲得HLA-G的NK細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)橐种菩约?xì)胞抑制其他NK細(xì)胞對(duì)靶細(xì)胞的殺傷。
　　方法:我們首先建立HLA-G慢病毒體系和SD至Wistar大鼠腎移植排斥反應(yīng)模型。腎移植模型的建立方法是腎動(dòng)靜脈原位吻合，輸尿管膀胱吻合，另外一側(cè)腎臟切除。在腎動(dòng)脈恢復(fù)血供前30分給予0.5ml含有107pfu的HLA-G慢病

3、毒。我們?cè)O(shè)計(jì)的陽(yáng)性對(duì)照組術(shù)后常規(guī)使用FK506抗排斥，陰性對(duì)照組以空白病毒轉(zhuǎn)染。術(shù)后第7天檢測(cè)受體大鼠的血清BUN和Cr值，取各組移植腎做病理組織學(xué)檢查，并測(cè)定HLA-G的表達(dá)水平。為了弄清HLA-G抑制NK細(xì)胞的殺傷作用在大鼠和人類(lèi)間的作用方式和效應(yīng)水平的差異，我們采用大鼠內(nèi)皮細(xì)胞和人類(lèi)血管內(nèi)皮細(xì)胞為靶細(xì)胞，在未轉(zhuǎn)染HLA-G慢病毒和轉(zhuǎn)染HLA-G慢病毒后，以大鼠NK細(xì)胞和人類(lèi)的NK細(xì)胞作為攻擊細(xì)胞，測(cè)定四種組合情況下，其殺傷率的差異

4、。
　　結(jié)果:輸注HLA-G慢病毒對(duì)于術(shù)后受體大鼠的生存期和改善腎功能的BUN與Cr指標(biāo)相對(duì)于空白病毒轉(zhuǎn)染的對(duì)照組沒(méi)有任何差別，但是明顯短于使用FK506的抗排斥的對(duì)照組。基于Banff標(biāo)準(zhǔn)的病理組織學(xué)檢查顯示，術(shù)后7天在實(shí)驗(yàn)組和陰性對(duì)照組存在嚴(yán)重的排斥反應(yīng)，而使用FK506抗排斥的陽(yáng)性對(duì)照組只有輕度排斥反應(yīng)。人NK細(xì)胞攻擊靶細(xì)胞人內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)轉(zhuǎn)染HLA-G慢病毒，殺傷率從74.8±14.1％顯著降低至21.2±4.7％(p＜0.0

5、5)，而鼠NK細(xì)胞攻擊人內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)轉(zhuǎn)染HLA-G慢病毒，殺傷率無(wú)明顯差別，從67.7±11.6％到65.8±10.9％(p＞0.05)。人NK細(xì)胞攻擊靶細(xì)胞大鼠內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)轉(zhuǎn)染HLA-G慢病毒，殺傷率從85.3±16.3％降低至31.7±7.8％，而鼠NK細(xì)胞攻擊鼠內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)轉(zhuǎn)染HLA-G慢病毒，殺傷率無(wú)明顯差別，從25.8±6.5％到26.0±5.9％。
　　結(jié)論:我們的實(shí)驗(yàn)研究表明在SD至Wistar大鼠腎移植模型中表達(dá)HLA-