微小RNA 423-5p調(diào)控三葉因子1基因表達(dá)及對(duì)胃黏膜上皮細(xì)胞生物學(xué)行為影響.pdf

1、背景：TFFs是胃腸道黏液細(xì)胞分泌的一類小分子多肽，在黏膜損傷、炎癥保護(hù)及腫瘤發(fā)展中具有重要作用，是潛在腫瘤標(biāo)志物，其表達(dá)及調(diào)控對(duì)胃腸道腫瘤診治具有重要意義。其中TFF1在黏膜損傷后的上皮修復(fù)中扮演著重要的角色，這個(gè)修復(fù)過程與黏膜上皮細(xì)胞的增殖、凋亡以及遷移能力都密切相關(guān)。microRNA家族在基因表達(dá)調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中具有關(guān)鍵作用，影響著多條信號(hào)傳導(dǎo)通路。課題組前期研究表明，三葉因子1（TFF1）受RNA423-5p（miRNA-423-5p

2、）的負(fù)性調(diào)控，是其下游靶基因。
　　目的：進(jìn)一步探索miRNA-423-5p在正常胃黏膜上皮細(xì)胞中負(fù)性調(diào)控TFF1，及其對(duì)胃黏膜上皮細(xì)胞損傷修復(fù)能力的影響。
　　方法：首先通過熒光定量PCR方法檢測(cè)正常胃黏膜上皮細(xì)胞與胃癌細(xì)胞株、正常組織與胃癌組織中miRNA-423-5p的差異表達(dá)，通過免疫組化以及Western blotting檢測(cè)正常組織與胃癌組織中TFF1的差異表達(dá)。隨后，人正常胃黏膜上皮細(xì)胞GES-1中過表達(dá)miR

3、NA-423-5p，應(yīng)用MTT、EdU以及平板集落實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖能力，應(yīng)用激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)細(xì)胞凋亡核皺縮，應(yīng)用Wound healing劃痕、Transwell小室檢測(cè)細(xì)胞遷移能力。
　　結(jié)果：miRNA-423-5p在正常胃黏膜上皮細(xì)胞和正常組織中低表達(dá)，而TFF1在正常胃黏膜上皮細(xì)胞和正常組織中高表達(dá)，二者表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。在GES-1細(xì)胞中過表達(dá)miRNA-423-5p后，TFF1的表達(dá)量下調(diào)，并促使胃黏膜細(xì)胞的增殖能力增