定點編輯人jmjd3基因的TALEN質(zhì)粒構建及jmjd3基因敲除對人宮頸癌細胞體外效應觀察.pdf

1、目的：
　　利用TALEN技術構建編輯人jmjd3基因的TALEN質(zhì)粒，并觀察Jmjd3敲除后人宮頸癌細胞體外生長情況。
　　方法：
　　構建編輯人jmjd3基因的TALEN質(zhì)粒載體（TALEN左臂質(zhì)粒L1及TALEN右臂質(zhì)粒R1），經(jīng)酶切鑒定，測序驗證；用TALEN左臂L1、TALEN右臂R1、EGFP熒光質(zhì)粒共同轉(zhuǎn)染人宮頸癌細胞系Hela，同時設未轉(zhuǎn)染的宮頸癌細胞為空白對照，轉(zhuǎn)染24小時后計算轉(zhuǎn)染效率。隨后采用濃度

2、為2ug/ul嘌呤霉素溶液進行篩選至空白對照組細胞全部死亡（>3d)，共轉(zhuǎn)染組細胞繼續(xù)培養(yǎng)，行RT-PCR檢測宮頸癌細胞內(nèi)jmjd3 mRNA表達水平，MTT檢測細胞增殖活力。
　　結果：
　　經(jīng)酶切鑒定，DNA測序及blast比對分析證實成功構建編輯人jmjd3基因TALEN質(zhì)粒對；轉(zhuǎn)染后Hela細胞與空白對照組相比，可見質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染組jmjd3 mRNA表達水平明顯降低，表達抑制率為（46.5±2.0）％；MTT檢測表明質(zhì)