多種因素對(duì)新生兒臍血單個(gè)核細(xì)胞及細(xì)胞因子表達(dá)水平影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：機(jī)體在長(zhǎng)期進(jìn)化過程中，產(chǎn)生了兩套免疫系統(tǒng)，即天然免疫和獲得性免疫。天然免疫是抵御病原微生物的第一道防線。單個(gè)核細(xì)胞（mononuclear cells）主要包括單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞，兩者都是免疫反應(yīng)中重要的細(xì)胞。新生兒免疫系統(tǒng)發(fā)育不成熟，尤其是先天免疫發(fā)育不健全，Th1/Th2細(xì)胞比例失衡，免疫反應(yīng)向Th2傾斜，易患各種變態(tài)反應(yīng)性疾病。研究證實(shí)，母乳中含有許多重要的抗體及細(xì)胞因子，對(duì)新生兒免疫系統(tǒng)的發(fā)育成熟具有重要的作用。而腸道菌群

2、也具有促進(jìn)免疫系統(tǒng)成熟之功效，可促進(jìn)免疫活性細(xì)胞分泌細(xì)胞因子、維持Th1/Th2型細(xì)胞反應(yīng)平衡、誘導(dǎo)免疫應(yīng)答或免疫耐受。
　　 本研究采用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)及酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)以塵螨變應(yīng)原、初乳及雙歧桿菌為刺激物，觀察其對(duì)新生兒臍血單個(gè)核細(xì)胞形態(tài)學(xué)和免疫學(xué)變化的影響：1.觀察無刺激及塵螨變應(yīng)原刺激后對(duì)臍血單個(gè)核細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響和對(duì)細(xì)胞因子IFN-γ、IL-4、IL-10表達(dá)水平及IFN-γ/IL-4比值的影響，探討新生兒免疫網(wǎng)絡(luò)特點(diǎn)及變

3、應(yīng)原刺激后新生兒免疫網(wǎng)絡(luò)的變化；2.觀察初乳、雙歧桿菌刺激后對(duì)臍血單個(gè)核細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響和對(duì)細(xì)胞因子IFN-γ、IL-4、IL-10表達(dá)水平及IFN-γ/IL-4比值的影響，探討其對(duì)新生兒免疫網(wǎng)絡(luò)的影響及對(duì)塵螨刺激后的免疫狀況的影響。研究結(jié)論為堅(jiān)持母乳喂養(yǎng)及圍生期服用益生菌對(duì)新生兒以后發(fā)生過敏性疾病的影
　　 方法：選取正常足月新生兒臍血32例，其中母親有過敏史且塵螨變應(yīng)原皮試陽性者15例，母親無過敏史且塵螨變應(yīng)原皮試陰性者17

4、例。每份血樣均采用甲基纖維素沉降臍血紅細(xì)胞，利用Ficoll密度梯度法分離出單個(gè)核細(xì)胞。置入24孔培養(yǎng)板中的6孔，各孔再分別加入PBS（空白對(duì)照）、塵螨變應(yīng)原+PBS、初乳、雙歧桿菌液、塵螨變應(yīng)原+初乳、塵螨變應(yīng)原+雙歧桿菌液。培養(yǎng)96小時(shí)觀察各孔細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化并取各孔細(xì)胞培養(yǎng)上清液，用ELISA法檢測(cè)IFN-γ、IL-4、IL-10濃度。統(tǒng)計(jì)學(xué)利用SPSS13.0版統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)計(jì)算。采用方差分析和t檢驗(yàn)，結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s

5、）表示，以α=0.05為檢驗(yàn)顯著性標(biāo)準(zhǔn)。
　　 結(jié)果：
　　 1.塵螨變應(yīng)原、初乳及雙歧桿菌刺激后，臍血單個(gè)核細(xì)胞趨向于分化、增殖。
　　 2.塵螨變應(yīng)原、初乳及雙歧桿菌刺激臍血單個(gè)核細(xì)胞后，各組細(xì)胞存活率無顯著差異（P>0.05），均>90％。
　　 3.過敏組、非過敏組臍血單個(gè)核細(xì)胞細(xì)胞因子表達(dá)水平及IFN-γ/IL-4比值的比較。
　　 AD組與NAD組IFN-γ表達(dá)比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0

6、.05）：AD組IL-4表達(dá)水平高于NAD組（P<0.05）；AD組IL-10表達(dá)水平低于NAD組（P<0.05）；AD組IFN-γ/IL-4比值低于NAD組（P<0.05）。
　　 4.過敏組多種因素刺激后臍血單個(gè)核細(xì)胞細(xì)胞因子表達(dá)水平和IFN-γ/IL-4比值的比較。
　　 塵螨刺激后，與無刺激比較：IFN-γ表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），IL-4表達(dá)增高（P<0.05），IL-10表達(dá)降低（P

7、N-γ/IL-4比值降低（P<0.05）。
　　 初乳刺激后，與無刺激比較：IFN-γ表達(dá)增高（P<0.05），IL-4表達(dá)降低（P<0.05），IL-10表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），IFN-γ/IL-4比值增高（P<0.05）。
　　 雙歧桿菌刺激后，與無刺激比較：IFN-γ表達(dá)增高（P<0.05），IL-4表達(dá)降低（P<0.05），IL-10表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），IFN-γ/IL-4比值增高（P<0

8、.05）。
　　 塵螨+初乳刺激后，與塵螨刺激后比較：IFN-γ表達(dá)增高（P<0.05），IL-4表達(dá)降低（P<0.05），IL-10表達(dá)及IFN -γ/IL-4比值增高（P<0.05）。
　　 塵螨+雙歧桿菌刺激后，與塵螨刺激后比較：IFN-γ表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），IL-4表達(dá)降低（P<0.05），IL-10表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），IFN-γ/IL-4比值增高（P<0.05）。
　　 5.

9、非過敏組多種因素刺激后臍血單個(gè)核細(xì)胞細(xì)胞因子表達(dá)水平和IFN-γ/IL-4比值的比較。
　　 塵螨刺激后，與無刺激比較：IFN-γ、IL-4表達(dá)水平均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），IL-10表達(dá)降低（P<0.05），IFN-γ/IL-4比值無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　 初乳刺激后，與無刺激比較：IFN-γ表達(dá)增高（P<0.05），IL-4、IL-10表達(dá)均降低（P<0.05），IFN-γ/IL-4比值增高（P<0

10、.05）。
　　 雙歧桿菌刺激后，與無刺激比較：IFN-γ表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），IL-4表達(dá)降低（P<0.05），IL-10表達(dá)及IFN-γ/IL-4比值均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　 塵螨+初乳刺激后，與塵螨刺激后比較：IFN-γ表達(dá)增高（P<0.05），IL-4、IL-10表達(dá)均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），IFN-γ/IL-4比值增高（P<0.05）。
　　 塵螨+雙歧桿菌刺激后，與塵螨

11、刺激后比較：IFN-γ、IL-4、IL-10表達(dá)水平及IFN-γ/IL-4比值均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1.塵螨變應(yīng)原、初乳及雙歧桿菌刺激臍血單個(gè)核細(xì)胞均促進(jìn)其分化增殖，并不影響其存活率。
　　 2.遺傳因素對(duì)新生兒免疫系統(tǒng)產(chǎn)生一定作用，有過敏史母親新生兒Th2水平高于其母親無過敏史者，Th1/Th2處于更加不平衡狀態(tài)，研究數(shù)據(jù)表明有過敏性家族史者免疫系統(tǒng)更不完善。
　　 3.

12、新生兒接觸塵螨后，有過敏家族史者Th2水平明顯上調(diào)；無過敏件家族史者Th1、Th2變化不明顯，表明遺傳易感者生后受到抗原刺激后更易導(dǎo)致過敏。
　　 4.無論母親是否為過敏體質(zhì)，母乳均有調(diào)節(jié)新生兒Th1/Th2平衡作用，且對(duì)接觸塵螨變應(yīng)原后的Th1/Th2失衡有一定糾正作用，對(duì)促進(jìn)新生兒免疫系統(tǒng)發(fā)育、成熟發(fā)揮重要作用。
　　 5.無論母親是否為過敏體質(zhì)，雙歧桿菌具有調(diào)節(jié)新生兒Th1/Th2平衡作用，并對(duì)接觸塵螨變應(yīng)原后造成