UV輻照致弱的日本血吸蟲(chóng)尾蚴誘導(dǎo)C57BL-6小鼠皮膚及引流淋巴結(jié)早期免疫應(yīng)答的動(dòng)態(tài)變化.pdf

1、血吸蟲(chóng)病至今仍是世界上一種嚴(yán)重的危害公眾健康的人獸共患寄生蟲(chóng)病.我國(guó)為日本血吸蟲(chóng)病流行區(qū)。2003年全國(guó)調(diào)查資料顯示，我國(guó)共有現(xiàn)癥患者80余萬(wàn)，受威脅人口達(dá)1億。 發(fā)展血吸蟲(chóng)病疫苗，實(shí)現(xiàn)化療“短效”作用及疫苗接種后的“長(zhǎng)效”免疫預(yù)防作用相結(jié)合來(lái)控制血吸蟲(chóng)病，是一個(gè)值得追尋的目標(biāo)。 長(zhǎng)期以來(lái)，在血吸蟲(chóng)病疫苗發(fā)展研究中，主導(dǎo)的策略思想是試圖模擬宿主自然感染后產(chǎn)生的免疫保護(hù)機(jī)理設(shè)計(jì)疫苗。但這一由感染誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答特征對(duì)再感染即

2、或有一定的抗力，也只是非消除性和低水平的，再感染不可避免。相比之下，輻照致弱尾蚴免疫動(dòng)物模型的確始終能夠產(chǎn)生高水平的保護(hù)力，這一模型的存在對(duì)我們研究其產(chǎn)生高水平保護(hù)力的機(jī)理，進(jìn)而脫離原有循血吸蟲(chóng)自然感染免疫應(yīng)答機(jī)理的視角，開(kāi)拓新的疫苗發(fā)展策略起到了很好的引導(dǎo)作用。 對(duì)終宿主而言，皮膚是血吸蟲(chóng)入侵的最早位點(diǎn)，也是具有獨(dú)特免疫功能且與整體免疫系統(tǒng)密切相關(guān)的組織器官。在輻照致弱尾蚴經(jīng)腹部皮膚免疫小鼠模型中，局部皮膚及引流淋巴結(jié)是最早接

3、觸童蟲(chóng)抗原的免疫組織器官。對(duì)曼氏血吸蟲(chóng)輻照致弱尾蚴皮膚期效應(yīng)的研究結(jié)果顯示：皮膚及其引流淋巴結(jié)對(duì)產(chǎn)生高保護(hù)性免疫力具有重要作用。觀察輻照致弱尾蚴免疫早期皮膚及引流淋巴結(jié)的免疫應(yīng)答特征有助于我們進(jìn)一步認(rèn)識(shí)其產(chǎn)生保護(hù)性免疫力的機(jī)制所在。 鑒于紫外線(UV)安全、有效、便捷等特點(diǎn)，所以常被選做輻照致弱的照射源。盡管近年來(lái)對(duì)日本血吸蟲(chóng)UV輻照致弱尾蚴保護(hù)性免疫的相關(guān)研究逐漸增多，但迄今為止，國(guó)內(nèi)外對(duì)UV輻照致弱的日本血吸蟲(chóng)免疫早期，宿主

4、的皮膚及引流淋巴結(jié)免疫應(yīng)答特征及其相關(guān)分子機(jī)制研究的報(bào)道尚不多見(jiàn)，尤其是與正常尾蚴感染的對(duì)照組進(jìn)行動(dòng)態(tài)比較觀察。 本研究分別建立了日本血吸蟲(chóng)正常/UV輻照尾蚴經(jīng)耳廓皮膚感染/免疫小鼠模型，通過(guò)HE染色觀察感染或免疫后第1、2、4、7、14、21天耳廓炎癥反應(yīng)動(dòng)態(tài)變化。進(jìn)而，采用免疫組化方法和Bio-plex液相蛋白芯片系統(tǒng)，從組織、細(xì)胞及分子水平觀察CD11c、IL-12p40在皮膚的表達(dá)和皮膚及其引流淋巴結(jié)IFN-γ、IL-4

5、、IL-10、IL-12p40分泌水平的變化。同期比較各項(xiàng)觀察指標(biāo)在兩種方式處理的小鼠中的異同。 本研究獲得如下主要結(jié)果：1、對(duì)不同時(shí)間點(diǎn)耳廓厚度的測(cè)定和HE染色反映的各個(gè)時(shí)間點(diǎn)耳廓炎癥進(jìn)行觀察顯示：和感染/免疫前相比，尾蚴鉆皮后，小鼠耳廓厚度均增加，持續(xù)至21天。正常尾蚴感染小鼠的耳廓厚度增加峰值早于UV輻照尾蚴免疫鼠，且維持時(shí)間短于UV輻照尾蚴免疫鼠。光鏡下，正常尾蚴感染耳廓第7天炎癥反應(yīng)最強(qiáng)烈。第14、21天，免疫反應(yīng)減輕

6、，耳廓皮膚結(jié)構(gòu)趨于正常。相比之下，UV輻照尾蚴免疫后第一周，炎癥反應(yīng)與正常尾蚴感染相似。第14天炎癥反應(yīng)達(dá)到峰值，遠(yuǎn)強(qiáng)于同期正常尾蚴感染，真皮內(nèi)大量嗜酸粒細(xì)胞浸潤(rùn)，淋巴細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞顯著增多。第21天，炎細(xì)胞比例成分與第14天相近，僅反應(yīng)程度有所下降?？傊啾日Ｎ豺矢腥臼?，UV輻照尾蚴免疫鼠耳廓炎癥高峰出現(xiàn)遲，但持續(xù)時(shí)間久。 2、采用冰凍切片免疫組化技術(shù)觀察正常尾蚴感染和輻照尾蚴免疫后不同時(shí)間點(diǎn)小鼠耳廓IL-12、CD1

7、1c表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：與陰參相比，尾蚴感染/免疫后不同時(shí)間點(diǎn)，IL-12、CD11c表達(dá)均增高，分別定位于胞漿和胞膜。在同一時(shí)間點(diǎn)，早期正常/UV輻照尾蚴處理小鼠耳廓組織IL-12、CD11c的表達(dá)并無(wú)明顯差異。但至第14天，這兩種因子在UV輻照尾蚴免疫小鼠的表達(dá)均高于正常尾蚴感染鼠，并延續(xù)至第21天。由此提示：在感染/免疫早期，機(jī)體局部針對(duì)正常/UV輻照尾蚴的免疫應(yīng)答即存在差異。 3、應(yīng)用Bio-plex液相蛋白芯片系統(tǒng)，檢測(cè)正

8、常/UV輻照尾蚴處理小鼠后不同時(shí)間點(diǎn)，耳廓及其引流淋巴結(jié)IFN-γ、IL-4、IL-12p40及IL-10的分泌水平。結(jié)果顯示：相比于正常小鼠，兩種方式處理的小鼠耳廓皮片培養(yǎng)上清中的IL-10僅略有增高，且各時(shí)間點(diǎn)間的差異不顯；IL-12除笫2天、第14天輻照組高于正常尾蚴組(P＜0.05)外，其余時(shí)間點(diǎn)兩者差別不明顯。至于耳廓引流淋巴結(jié)，正常尾蚴感染組IL-12自第1天起升高后，第2、4、14、21天維持于較高水平；而UV輻照尾蚴免疫

9、組IL-12第1天迅速增高后，第2天大幅降低，第4天又略有升高。在第14天略下降后，第21天又回升。同一時(shí)間點(diǎn)，除第1天免疫組高于感染組、第14天感染組高于免疫組外，其余時(shí)間兩組IL-12無(wú)明顯差異。正常尾蚴感染鼠的IL-4、IL-10、IFN-γ上升快，在第4天均到達(dá)峰值，后又迅速下降，且在第4天，IFN-γ的分泌高于IL-4。而UV輻照尾蚴免疫鼠的IL-4、IL-10、IFN-γ水平則隨時(shí)間延長(zhǎng)逐步增高，第14天達(dá)峰值，第21天略有