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1、目的：構(gòu)建含有人骨形態(tài)發(fā)生蛋白-4基因的非復(fù)制型腺病毒表達載體()AdE/hBMP-4并檢測目的基因的表達，以期用于骨組織工程基因治療的研究。 方法：EcoRI雙酶切質(zhì)粒pCS2(+)/hBMP-4獲得目的基因片段，將hBMP-4基因片段首先克隆至非病毒真核表達載體pcDNA3.1(+)，后利用該載體上含有的酶切位點KpnI和XbaI，再將hBMP-4基因片段定向克隆至腺病毒穿梭質(zhì)粒pShuttle-CMV，接著用電穿孔法轉(zhuǎn)化至
2、含有骨架質(zhì)粒pAdEasy-1的EcoliBJ5183/p中進行同源重組，脂質(zhì)體法將腺病毒重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至HEK293細胞，利用HEK293細胞中表達的腺病毒E1蛋白將重組體包裝成含有hBMP-4基因的完整非復(fù)制型腺病毒，病毒顆粒感染HEK293和HeLa細胞，提取總RNA和總蛋白，進行RT-PCR和Western-blot檢測。 結(jié)果：獲得了含有目的基因的非病毒真核表達載體pcDNA3.1(+)/hBMP-4，經(jīng)酶切、測序構(gòu)建正
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