潰結(jié)安對大鼠IL-6基因mRNA水平的影響及pSilencer干擾載體的構(gòu)建.pdf

1、目的：研究潰結(jié)安對潰瘍性結(jié)腸炎(Ulcerative colitis，UC)大鼠白細(xì)胞介素-6(interleukin 6，IL-6)基因mRNA水平的影響及構(gòu)建具有特異性阻斷大鼠IL-6基因的小干擾RNA(small interferening RNA，siRNA)表達(dá)體系，為確定潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病基因及研究維藥西帕依潰結(jié)安治療潰瘍性結(jié)腸炎作用機(jī)理提供新的方法。 方法：Wistar大鼠分為正常組，潰瘍性結(jié)腸炎模型組，生理鹽水陰性

2、對照組組，5-氨基水楊酸陽性對照組，潰結(jié)安干預(yù)組共5組，采用2，4-二硝基氯苯(DNCB)復(fù)合乙酸方法造成潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型，從結(jié)腸中提取總RNA經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)得到目的基因的cDNA，經(jīng)PCR得到目的基因的擴(kuò)增片段。應(yīng)用siRNA設(shè)計軟件在大鼠IL-6的mRNA上尋找特異性的短核苷酸序列并設(shè)計合成兩條互補(bǔ)的小發(fā)夾結(jié)構(gòu)的DNA序列，經(jīng)退火后形成雙鏈DNA片段，采用基因克隆技術(shù)，將其克隆到pSilencer<'TM

3、> 1.0-U6的載體中，轉(zhuǎn)化DH5a大腸桿菌，提取質(zhì)粒，酶切方法和測序法對重組體進(jìn)行鑒定。 結(jié)果：潰結(jié)安降低了大鼠IL-6基因mRNA水平。酶切和序列測定表明，成功構(gòu)建了大鼠IL-6基因的siRNA表達(dá)體系。 結(jié)論：大鼠IL-6基因表達(dá)的變化可能與潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)生發(fā)展相關(guān)聯(lián)；潰結(jié)安治療作用可能與其下調(diào)了IL-6基因表達(dá)有關(guān)：成功構(gòu)建siRNA表達(dá)體系，為確定潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病基因及研究維藥潰結(jié)安治療潰瘍性結(jié)腸炎的靶點(diǎn)打