解毒化濁軟肝法對免疫性肝纖維化大鼠的防治作用及其機理初探.pdf

1、目的：我們在臨床實踐中，運用解毒化濁軟肝法治療免疫性肝纖維化取得了良好的療效。本研究旨在通過動物實驗，觀察以解毒化濁軟肝法立法的化纖V號方對免疫性肝纖維化大鼠組織病理學(xué)、血清學(xué)、免疫組化等指標的影響，進一步研究解毒化濁軟肝法對免疫性肝纖維化的防治作用及初步探討其作用機理，并由此理論對肝纖維化的病因病機及其防治做全面的闡述。 方法：本課題主要進行實驗研究。1立論依據(jù)肝纖維化是由于各種因素引起肝臟損傷，使細胞外基質(zhì)(ECM)生成增多

2、，ECM降解減低，二者失去平衡，最終形成纖維化。在我國，2/3的肝纖維化患者來自病毒性肝炎后肝纖維化，即免疫性肝纖維化。導(dǎo)師李佃貴教授通過多年臨床實踐認為，肝炎病毒屬濁毒之邪，人體正氣虧虛、情志抑郁，濁毒之邪趁機侵犯肝經(jīng)，日久留戀不去，導(dǎo)致肝之氣機阻滯；氣滯則生濕成瘀，濕久再成濁，瘀久化熱又為毒，毒借濁質(zhì)，濁挾毒性，濁毒反復(fù)糾纏，膠結(jié)滯于脅下，疾病始生，而其病機關(guān)鍵在于濁毒內(nèi)滯。故以解毒化濁軟肝法立法恰切病機，在此法指導(dǎo)下，創(chuàng)化纖V號方

3、，在臨床上治療本類疾病，亦取得了良好效果。 2實驗研究將SD大鼠隨機分為4組：A組為正常組，B組為模型組，C組為陽性對照組，D組為防治組。采用離心后的豬血清給B、C、D各組大鼠腹腔注射，每只大鼠注射0.5ml，每周2次，持續(xù)時間為12周；C組同時灌服復(fù)方鱉甲軟肝片；D組同時灌服化纖V號方。實驗同時觀察動物的神態(tài)、外觀、活動情況，稱量動物體重。在實驗第12周全部處死大鼠，取大鼠血清做肝功能指標、肝纖維化指標檢查，取大鼠肝組織做HE

4、染色、Mallory膠原染色、肝纖維化分級及TGF-β1的免疫組化。 結(jié)果：如下。l大鼠一般狀態(tài)的變化A組大鼠，活動自如，被毛有光澤，精神狀態(tài)好，無異常狀態(tài)出現(xiàn)。B組大鼠被毛欠光華，活動攝食均未見減少，精神狀態(tài)可，有的糞便變稀松。C組大鼠活動尚可，被毛光澤稍差，精神狀態(tài)可。D組大鼠活動正常，被毛光澤，精神狀態(tài)好，無異常狀態(tài)出現(xiàn)。各組大鼠體重不斷增長，B、C、D組與A組大鼠比較無明顯變化(p＞0.05)。 2大鼠肝組織病理

5、變化A組大鼠肝組織肝小葉排列整齊，肝細胞核大而圓，位于中央，偶見雙核。Mallory染色顯示膠原纖維只在中央靜脈周圍、匯管區(qū)周圍有少量表達，含量極少。B組大鼠肝小葉被破壞，肝細胞變形多為水樣變性及氣球樣變性，胞質(zhì)疏松淡染，可見雙核細胞，中央靜脈及門管區(qū)周圍伴有中性粒細胞及淋巴細胞浸潤。Mallory染色可見膠原纖維增生，把原肝小葉分割，形成無中央靜脈或多個中央靜脈的肝細胞團。C組大鼠肝組織結(jié)構(gòu)尚未恢復(fù)正常，肝細胞排列基本正常，未見到肝細

6、胞團。肝細胞空泡樣變或氣球樣變較模型組減少，偶見雙核肝細胞。Mallory染色顯示膠原纖維沉積比B組減少，中央靜脈及匯管區(qū)仍有膠原纖維增生。D組大鼠肝組織結(jié)構(gòu)基本正常，中央靜脈偏位不明顯；肝細胞核位于中央，胞質(zhì)豐富，偶見到雙核肝細胞；肝細胞氣球樣變、脂肪樣變等病理改變減輕；Mallory染色顯示中央靜脈及門管區(qū)的膠原纖維沉積比B組明顯減少，未形成假小葉。肝纖維化分級結(jié)果顯示：B組肝纖維化分級明顯高于A組，二者比較有顯著性差異(P＜0.0

7、5)；C、D組大鼠肝纖維化分級明顯低于B組(P＜0.05)；D組大鼠的肝纖維化分級低于C組，二者比較有顯著性差異(P＜0.05)。 3肝功能的變化B組大鼠肝功能指標與A組比較明顯升高，有顯著性差異(P＜0.05)；C、D兩組肝功能指標較B組明顯降低，有顯著性差異(P＜0.05)。 4肝纖指標的變化B組大鼠肝纖指標與A組比較明顯升高(P＜0.05)；C、D兩組肝纖指標較B組明顯降低(P＜0.05)，D組肝纖指標與C組比較明

8、顯降低，有顯著性差異(p＜0.05)。 5TGF-βl蛋白表達的變化A組大鼠肝組織TGF-β1表達不明顯，主要表達于肝竇的Disse間隙中，在小葉中央靜脈周圍細胞及纖維間隔周圍也有少量表達。B組大鼠肝組織中央靜脈周圍、匯管區(qū)周圍、Disse間隙中及纖維間隔周圍均有陽性表達的細胞，陽性細胞記數(shù)與正常組比較明顯增多，有顯著性差異(P＜0.05)。C組大鼠肝組織中央靜脈周圍、匯管區(qū)及纖維間隔周圍均有少量陽性細胞表達，但著色較模型組淺，

9、陽性細胞記數(shù)與模型組比較明顯降低，有顯著性差異(P＜O.05)；D組大鼠肝組織在匯管區(qū)周圍、中央靜脈周圍及纖維間隔附近可見散在的陽性細胞表達，但染色較淺；Disse間隙著色與模型組比較變淺，陽性細胞記數(shù)與模型組比較明顯降低，有顯著性差異(P＜O.05)，與陽性對照組比較明顯降低，有顯著性差異(P＜O.05)。 結(jié)論：1本研究用豬血清腹腔注射復(fù)制大鼠肝纖維化動物模型，經(jīng)肝組織病理得到證實，模型復(fù)制成功。2以解毒化濁軟肝法立法所制的