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1、原發(fā)性肝癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)是我國(guó)的常見(jiàn)惡性腫瘤,防治肝癌是全世界防治疾病的重要任務(wù),是醫(yī)學(xué)領(lǐng)域亟待解決的重大課題。
p160蛋白家族的乳腺癌擴(kuò)增性抗原1(Amplified in Breast Cancer1,AIB1)是一種具有多種生理學(xué)功能的轉(zhuǎn)錄協(xié)同因子,它能夠與核受體等多種轉(zhuǎn)錄因子相互作用從而增強(qiáng)它們的轉(zhuǎn)錄活性。多項(xiàng)研究證明,A1B1在多種腫瘤的惡化過(guò)程中起重要的作用。AI
2、B1在68%的肝癌組織中過(guò)表達(dá),并且能夠促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖、侵襲和成瘤,是一種公認(rèn)的癌基因。AIB1由多個(gè)功能性結(jié)構(gòu)域組成,其中CBP/p300相互作用結(jié)構(gòu)域(CBP/p300-interaction domain,CBP)參與了AIB1與輔激活因子CBP/p300的結(jié)合,而CBP/p300在核受體上的募集是AIB1發(fā)揮反式激活作用,行使其促轉(zhuǎn)錄作用的必要條件。
SELEX是“配體通過(guò)指數(shù)富集達(dá)到系統(tǒng)進(jìn)化”(Systema
3、tic evolution of ligandsby exponential enrichment)的縮寫(xiě),用于研究小分子核酸與靶物質(zhì)相結(jié)合的部位、序列及空間構(gòu)象。經(jīng)SELEX篩選出的配體為適配子(Aptamer),能夠起到識(shí)別靶標(biāo)蛋白甚至其生物活性抑制的作用。
因此,我們計(jì)劃用SELEX技術(shù)篩選獲得特異性和AIB1的CID結(jié)構(gòu)域結(jié)合,并抑制AIB1對(duì)CPB/p300的募集作用的核酸適配子,從而抑制其促轉(zhuǎn)錄激活作用,為肝癌
4、的治療提供了創(chuàng)新性的思路和方法。
本文以AIB1蛋白的CID結(jié)構(gòu)域?yàn)榘袠?biāo),構(gòu)建其真核表達(dá)載體,獲得AIB1-CID-Flag融合蛋白,經(jīng)過(guò)12輪的篩選,獲得了8條強(qiáng)結(jié)合能力的單鏈DNA核酸適配子。我們選擇其中最優(yōu)的23號(hào)序列作為研究對(duì)象,分別檢測(cè)了它與AIB1五個(gè)功能結(jié)構(gòu)域的結(jié)合情況和與p160家族三個(gè)成員的結(jié)合情況。最后,我們用免疫共沉淀驗(yàn)證了篩選所得的CID23核酸適配子能夠抑制AIB1對(duì)p300蛋白的募集作用。說(shuō)明我
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