茶黃素與TGF-β3對(duì)兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向軟骨細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)分化地影響.pdf

1、目的:軟骨損傷在臨床上非常多見(jiàn),但修復(fù)非常困難,組織工程的發(fā)展使軟骨修復(fù)的研究得到長(zhǎng)足的發(fā)展,間充質(zhì)干細(xì)胞被認(rèn)為是一種理想的種子細(xì)胞。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β3可以誘導(dǎo)軟骨的代謝和增殖,而茶黃素也有促進(jìn)軟骨代謝和增殖的作用,本實(shí)驗(yàn)探討在茶黃素和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β3的聯(lián)合作用下對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化和增殖的影響。
　　方法:本實(shí)驗(yàn)于2009-09/12在安徽醫(yī)科大學(xué)附屬省立醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室完成。
　?、艑?shí)驗(yàn)動(dòng)物:健康6~7周齡清

2、潔級(jí)新西蘭大白兔15只,雌雄不拘,由安徽醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物試驗(yàn)中心提供,實(shí)驗(yàn)過(guò)程中對(duì)家兔處置符合動(dòng)物倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)。⑵實(shí)驗(yàn)方法:全身肝素麻醉狀態(tài)下處死動(dòng)物,取雙側(cè)肱骨和股骨,剔去附麗軟組織,切除兩側(cè)骺端(包括骺板),全骨髓法分離及培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,按6×104/L的細(xì)胞密度接種,當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)至90％左右融合時(shí)消化傳代。取第3代細(xì)胞按1×104/ml地密度接種,置入含地塞米松10-8mmol/L、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β310μg/L和重組人胰島素15mg

3、/L的DMBM成軟骨誘導(dǎo)液培養(yǎng)二周,取第三代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分為3組:對(duì)照組:完全培養(yǎng)基加地塞米松10-8mmol/L、維生素C10mmol/L。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子組:完全培養(yǎng)基加地塞米松10-8mmol/L、維生素C10mmol/L、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β310μg/L。茶黃素組:完全培養(yǎng)基加地塞米松10-8mmol/L、維生素C10mmol/L、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β310ng/mL、茶黃素30mg/L。⑶評(píng)估:在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)狀況和形態(tài)變化

4、,用甲苯胺藍(lán)染色和阿利新藍(lán)比色法測(cè)定各板每孔中葡萄糖氨基聚糖含量,免疫檢測(cè)儀測(cè)定3組的吸光度值鑒別II型膠原。
　　結(jié)果:骨髓基質(zhì)干細(xì)胞增值能力旺盛,培養(yǎng)24小時(shí)為細(xì)胞適應(yīng)期,72小時(shí)為對(duì)數(shù)增長(zhǎng)期,一周后進(jìn)入平臺(tái)期,以后速度減慢,細(xì)胞數(shù)減少;骨髓中分離獲得地骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在體外增殖旺盛,細(xì)胞經(jīng)茶黃素和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β3誘導(dǎo)后生長(zhǎng)明顯減緩。加入誘導(dǎo)液誘導(dǎo)二周后,誘導(dǎo)組與對(duì)照組均有顯著的差異性(P<0.05),誘導(dǎo)組之間同樣具有差異性