CTGF和TGFβ-,1-mRNA在糖尿病足潰瘍的表達(dá)及黃芪注射液局部外敷治療對其表達(dá)的影響.pdf

1、糖尿病足部潰瘍組織中細(xì)胞生長因子量和活性的改變及相互間比例失衡可以導(dǎo)致慢性炎癥持續(xù)、組織修復(fù)能力下降，從而使?jié)儾灰子?。正常的皮膚組織損傷愈合過程中由多種細(xì)胞分泌許多生長因子，這些生長因子包括轉(zhuǎn)化生長因子β(TGFβ)、血小板源生長因子(platelet-derivedgrowthfactor，PDGF)、成纖維細(xì)胞生長因子(fibroblastgrowthfactor，F(xiàn)GF)、表皮生長因子(epidermalgrowthfacto

2、r，EGF)等，它們可作為分子信號控制細(xì)胞增殖、分化、移行和代謝，促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)形成，促進(jìn)傷口的愈合。而在慢性創(chuàng)傷中由于炎癥因子如TNF-α、IL-β的持續(xù)升高則促進(jìn)了基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)合成，而MMPs可降解ECM從而抑制了愈合進(jìn)程。研究表明細(xì)胞因子TGFβ1和CTGF可以促進(jìn)創(chuàng)傷修復(fù)。TGFβ是細(xì)胞因子家族的一員，可由血小板、成纖維細(xì)胞、巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，血小板是其主要來源。結(jié)締組織生長因子(CTGF)是近十年來發(fā)現(xiàn)的一

3、種細(xì)胞因子，其生物學(xué)作用及作用機(jī)制尚未明確。在正常皮膚組織損傷愈合過程中發(fā)現(xiàn)CTGF及TGFβ1在創(chuàng)面中表達(dá)明顯增加，而在慢性創(chuàng)傷中TGFβ1水平及活性較急性創(chuàng)傷中明顯下降。多項動物實驗報道加入使用外源性生長因子(PDGF、bEGF、TGFβ等)可以促進(jìn)急性傷口及不易愈合傷口的愈合。TGF-β(包括TGF-β1，2，3)是誘導(dǎo)CTGF生成的最重要的因子，持續(xù)高血糖狀態(tài)下形成的糖基化終產(chǎn)物(AGEs)在腎臟及血液中也可以刺激CTGF和TG

4、F-β1的表達(dá)。臨床實踐證實中藥黃芪可以促進(jìn)糖尿病足潰瘍創(chuàng)面愈合，但其機(jī)制并不清楚。關(guān)于TGF-β(包括TGF-β1，2，3)在組織修復(fù)中作用的研究比較多，包括蛋白水平及分子水平表達(dá)。但目前對編碼CTGF及TGFβ1的基因在糖尿病足潰瘍組織中的表達(dá)情況及其在糖尿病足病發(fā)病機(jī)制中的作用的研究則未見有報道。 目的：檢測CTGF和TGFβ1mRNA在糖尿病足潰瘍創(chuàng)面組織中的表達(dá)，探討給予黃芪注射液外敷治療后其變化規(guī)律以及與組織修復(fù)結(jié)局

5、的關(guān)系。 2方法：1.糖尿病足潰瘍組病例10例，均符合1999年WHO糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)，其中男性6例女性4例，年齡57.0±8.6歲，其空腹血糖(FBG)9.4±1.6mmol/l，餐后2小時血糖(P2BG)14.2±2.4mmol/l，糖化血紅蛋白(HbA1c)9.1±1.0％，糖尿病足潰瘍病程超過4周，排除下肢靜脈性潰瘍。按照Wagner分級法，Ⅲ級6例，Ⅳ級4例。標(biāo)本取材于患者潰瘍邊緣組織。正常對照組5例，取自年齡(55.6

6、±9.4歲)、性別(男性3例女性2例)等與前兩組相匹配的無糖尿病一般手術(shù)患者的手術(shù)切口，排除合并系統(tǒng)性硬化病、腎病等纖維化疾病這些疾病的病例。標(biāo)本采集后立即剔除血管及結(jié)締組織并置于液氮罐凍存。 2.從標(biāo)本中提取RNA并進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)得到逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)產(chǎn)物cDNA。采用TaqMan雙標(biāo)記探針和擴(kuò)增引物建立檢測mRNA的實時熒光定量RT-PCR技術(shù)，用陽性定量標(biāo)準(zhǔn)品繪制定量標(biāo)準(zhǔn)曲線，實時熒光定量PCR儀檢測在糖尿病足潰瘍組織和正常皮膚中

7、CTGFmRNA和TGFβ1mRNA的表達(dá)。 3.10例糖尿病足潰瘍組病例按就診時間先后隨機(jī)分組為黃芪組和一般治療組兩個亞組，兩組患者年齡、性別、糖尿病足潰瘍病程、Wagner分級、空腹血糖、餐后2小時血糖、糖化血紅蛋白等指標(biāo)經(jīng)統(tǒng)計分析比較無顯著性差異(P＞0.05)，具有可比性。兩組患者均給予一般基礎(chǔ)治療，治療組加用黃芪注射液外敷潰瘍局部，治療7天后再次取患者潰瘍邊緣組織標(biāo)本檢測CTGF和TGFβ1mRNA的表達(dá)。 結(jié)

8、果：1.CTGFmRNA及TGFβ1mRNA在糖尿病足潰瘍組及正常對照組中均有表達(dá)。CTGFmRNA在糖尿病足潰瘍組0.25±0.06×104copies/ugmRNA，正常對照組4.37±1.60×105copies/ugmRNA；TGFβ1mRNA在糖尿病足潰瘍組4.05±2.44×105copies/ugmRNA，正常對照組3.55±2.18×106拷貝。統(tǒng)計分析示糖尿病足潰瘍組與正常對照組中CTGFmRNA和TGFβ1mRNA的

9、表達(dá)相比較差異有顯著性(CTGFmRNANSvs.DFUP=0.010＜0.05，TGFβ1mRNANSvs.DFUP=0.010＜0.05)。 2.糖尿病足潰瘍組患者分為黃芪組和一般治療組兩個亞組，黃芪組和一般治療組給予不同治療后TGFβ1mRNA的表達(dá)在黃芪組6.12±3.15×106copies/ug3mRNA，在一般治療組1.75±0.95×106copies/ugmRNA，用配對t檢驗對兩者比較得t=3.41，P=0.

10、027＜0.05，兩組有統(tǒng)計學(xué)差異。CTGFmRNA的表達(dá)在黃芪組7.67±2.33×104copies/ugmRNA，在一般治療組3.11±1.77×104copies/ugmRNA，用配對t檢驗對兩者比較得t=7.82，P=0.001＜0.05，兩組有統(tǒng)計學(xué)差異。 結(jié)論：1.與正常皮膚組織相比較，在糖尿病足潰瘍組織中CTGFmRNA和TGFβ1mRNA表達(dá)明顯下降。 2.加用黃芪注射液外敷糖尿病足潰瘍局部治療后CTG