急性心肌梗死患者外周血單個(gè)核細(xì)胞NADPH氧化酶2的表達(dá)和活性與氧化應(yīng)激的關(guān)系研究.pdf

1、背景活性氧的增加與心血管疾病密切相關(guān)，有研究證實(shí)活性氧參與了動(dòng)脈粥樣硬化的病理過(guò)程。而產(chǎn)生活性氧的主要酶體之一是尼可酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(NAPDH氧化酶，NOX)。NOX2主要分布在中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中。NOX2激活能夠產(chǎn)生活性氧，進(jìn)一步引起LDL和蛋白的氧化。目前有關(guān)急性心肌梗死患者單個(gè)核細(xì)胞NOX2的表達(dá)和活性與氧化應(yīng)激的關(guān)系的研究尚少，本研究就此問(wèn)題作初步的探討。 目的：探討急性心肌梗死患者外周血單個(gè)

2、核細(xì)胞NOX2的表達(dá)和活性與氧化應(yīng)激的關(guān)系，為從抗氧化的角度防治心肌梗死和動(dòng)脈粥樣硬化提供理論依據(jù)。 方法：選擇35例急性心肌梗死患者為AMI組，32例健康人為對(duì)照組。兩組均空腹抽血查生化指標(biāo)及Hs-CRP，通過(guò)檢測(cè)血清中抗氧化酶類SOD的活性、脂類氧化應(yīng)激標(biāo)記物MDA、蛋白氧化應(yīng)激標(biāo)記物蛋白羰基化，對(duì)AMI組和正常對(duì)照組機(jī)體氧化應(yīng)激狀態(tài)進(jìn)行全面分析。在此基礎(chǔ)上，進(jìn)一步用Real-time PCR及Western blot比較A

3、MI組和正常對(duì)照組單個(gè)核細(xì)胞中NOX2及其亞組分的表達(dá)，并應(yīng)用間接免疫熒光法對(duì)NOX2亞組分p47phox在細(xì)胞中的定位進(jìn)行檢測(cè)，比較AMI組和正常對(duì)照組NADPH氧化酶的活性。最后用SPSS軟件對(duì)所檢測(cè)的臨床指標(biāo)、氧化應(yīng)激指標(biāo)和NOX2及其亞組分的表達(dá)進(jìn)行分析。 結(jié)果： (1)AMI組MDA為8.14±2.13(nmol/ml)，明顯高于對(duì)照組4.75±2.56(nmol/ml)(p<0.001)。AMI組血清蛋白羰基化水平明

4、顯高于正常組，為正常組的1.64倍(P<0.05)。AMI組SOD活力水平為89.14±5.93(U/ml)，明顯低于正常組100.00±8.87(U/ml)，兩組間有顯著性差異(P<0.01)。AMI組和對(duì)照組的Hs-CRP水平分別為8.74±4.62(mg/dl)及0.22±0.56(mg/dl)(p<0.001)。(2)Real-timePCR的檢測(cè)結(jié)果表明，AMI組和對(duì)照組的NOX2相對(duì)含量分別為1.62±0.76和0.96±0

5、.58。與正常對(duì)照相比，AMI組單個(gè)核細(xì)胞中NOX2表達(dá)明顯增加(P<0.001)，而其它亞組分p47phox，p22phox的表達(dá)無(wú)明顯差異。Western blot的結(jié)果與以上結(jié)果相一致。(3)在AMI組中，P 47phox高度活化，活化率AMI組為59.59％，對(duì)照組為18.7％，存在顯著差異(P<0.01)。(4)AMI組中FBS、TC、HDL、Hs-CRP和UA與對(duì)照組有顯著性差異。相關(guān)性分析表明，NOX2和MDA的升高分別與

6、Hs-CRP正相關(guān)。(5)AMI合并糖尿病與AMI無(wú)糖尿病患者NOX2、MDA、SOD和Hs-CRP的水平無(wú)明顯差異。 結(jié)論： (1) AMI組患者血清中MDA和蛋白羰基化比對(duì)照組有明顯的升高，而SOD水平下降，說(shuō)明AMI時(shí)機(jī)體處于氧化應(yīng)激狀態(tài)，提示這種氧化應(yīng)激可能與動(dòng)脈粥樣硬化斑塊不穩(wěn)定有關(guān)。 (2) NOX2在AMI組患者血單個(gè)核細(xì)胞的表達(dá)比對(duì)照組明顯增高，而p47phox和p22phox在兩組的表達(dá)沒(méi)有差異