人可溶型CD155分子產(chǎn)生機(jī)制的研究.pdf

1、人CD155 分子最先由Bernhardt 等人于1989 年發(fā)現(xiàn)，該分子能夠介導(dǎo)脊髓灰質(zhì)炎病毒（poliovirus，PV）入侵機(jī)體，引起脊髓灰質(zhì)炎，因此命名為PVR（poliovirus receptor）。免疫球蛋白超家族成員（IgSF）CD155 屬于黏附分子中的Nectin 家族，參與細(xì)胞的黏附和黏附連接（Ajs）的形成，并且在介導(dǎo)惡性腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。因CD155 同Nectins 的差別，2003 年，Taka

2、i 等人將CD155 命名為Necl-5（Nectin like molecule-5），隨后的研究發(fā)現(xiàn)該分子還與胚胎期神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育有關(guān)。CD155 在人多種正常細(xì)胞上低水平表達(dá)，而在多種腫瘤細(xì)胞上高表達(dá)。最近研究表明，CD155 為CD226 的配體，CD155 與CD226 分子的相互作用介導(dǎo)了NK 細(xì)胞殺傷腫瘤的作用，并且成為NK 細(xì)胞殺傷腫瘤的研究熱點(diǎn)之一，備受關(guān)注。作為黏附分子和免疫調(diào)節(jié)膜分子，該分子存在著可溶型形式（sCD

3、155），可能在調(diào)節(jié)病毒入侵、細(xì)胞黏附和腫瘤的免疫監(jiān)視中起到重要作用。以往研究發(fā)現(xiàn)許多可溶型膜分子與一些疾病的發(fā)生和發(fā)展有關(guān)，產(chǎn)生機(jī)制可以是通過細(xì)胞直接分泌，也可以由一些蛋白酶水解跨膜分子的胞膜外區(qū)，使其脫落形成。而sCD155 的產(chǎn)生機(jī)制和功能至今尚無確切定論。 本實(shí)驗(yàn)首先采用間接免疫熒光染色和FCM分析了人多種細(xì)胞系的CD155表達(dá)。CD155分子在細(xì)胞系上的表達(dá)分布有著一定的規(guī)律性：不表達(dá)于人B細(xì)胞系、NK 細(xì)胞系和單核細(xì)

4、胞系；而在T細(xì)胞系和巨核細(xì)胞系有表達(dá)，在內(nèi)皮細(xì)胞系、上皮細(xì)胞系、上皮細(xì)胞來源的癌細(xì)胞系、膠質(zhì)瘤細(xì)胞系和黑色素瘤細(xì)胞系上均有高水平表達(dá)。 采用本室制備的10株抗CD155胞膜外區(qū)單克隆抗體（mAb），純化后標(biāo)記辣根過氧化物酶（HRP），通過競爭ELISA法確定了這10株mAbs識別CD155胞膜外區(qū)的3 組表位，篩選出夾心ELISA最佳包被和檢測抗體分別為FMU-CD155.2和HRP/FMU-CD155.10，建立了檢測sCD1

5、55的夾心ELISA方法，敏感性為200ng/L，具有良好的穩(wěn)定性。利用此夾心ELISA方法對正常人和腫瘤病人血清中的sCD155進(jìn)行了檢測，正常人的血清sCD155濃度范圍為1.426～6.549μg/L（中位數(shù)2.529μg/L），部分腫瘤（白血病、淋巴瘤、胰腺腫瘤、乳腺癌和肺癌）病人血清中的sCD155水平低于正常人，其余腫瘤病人血清中的sCD155水平與正常人無顯著差異。 采用K562 細(xì)胞為探討sCD155 產(chǎn)生機(jī)制的

6、細(xì)胞模型，以不同蛋白酶抑制劑處理K562 細(xì)胞，用PMA 刺激K562 細(xì)胞不同時間，有的實(shí)驗(yàn)加入絲氨酸蛋白酶抑制劑AEBSF 和半胱氨酸蛋白酶抑制劑NEM，用間接免疫熒光染色及FCM 分析膜型CD155（mCD155）表達(dá)，同時用夾心ELISA 法檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清中sCD155 水平。結(jié)果表明靜止的K562 細(xì)胞mCD155 表達(dá)的陽性率約為15.7％。5mM AEBSF 或0.2mM NEM 處理細(xì)胞6h，mCD155 表達(dá)陽性率均

7、顯著增加，分別上升到96.1％和54.1％，并以時間和劑量依賴方式調(diào)節(jié)靜止細(xì)胞mCD155 的表達(dá)。PMA 刺激K562 細(xì)胞可同時增加mCD155和sCD155 的表達(dá)，而加入AEBSF 和NEM 的細(xì)胞mCD155 表達(dá)均有增加，PMA+AEBSF 組較PMA+NEM 組mCD155 上升幅度大；同時加入蛋白酶抑制劑AEBSF 或NEM 后，細(xì)胞培養(yǎng)上清中sCD155 的濃度均明顯下降。而其他蛋白酶抑制劑對K562 細(xì)胞mCD155