小劑量胰島素局部應(yīng)用對移植真皮替代物血管化過程的影響.pdf

1、目的觀察小劑量胰島素局部應(yīng)用對真皮替代物移植后血管化過程的影響。 方法 1.豬脫細(xì)胞真皮基質(zhì)(swineacellulardermalmatrixsADM)制備。 以脊柱為中心取皮，1∶1000新潔爾滅浸泡20分鐘消毒后，10×10cm2規(guī)格、厚為0.5mm的斷層皮片。然后用10％氯化鈉溶液37℃恒溫下作用24-48小時(shí)，吸處鹽液，輕輕撕去表皮，5％碳酸氫鈉浸泡30分鐘，再用0.25％胰蛋白酶加0.1％EDTA3

2、7℃恒溫下浸泡90分鐘，無菌生理鹽水沖洗干凈后，網(wǎng)狀植皮機(jī)制成網(wǎng)狀，置2-8℃條件下保存待用。 2.將144只大鼠按sADM下浸潤注射不同濃度胰島素，設(shè)為0.1U(A)、0.05U(B)、0.01U(C)組和(D)等滲鹽水組作為對照。隔日注射，至術(shù)后第13d止。于埋植后1、2、3、4、7、10、14、21、28d取真皮替代物組織活檢，HE及免疫組織化學(xué)染色觀察移植物血管化過程，并測定血糖濃度的變化。 結(jié)果 1.血

3、糖濃度的變化： B、C、D組注射胰島素后6h血糖波動(dòng)在4.0-8.40mmol/L與術(shù)前無顯著性差異(P＞0.05)，A組注射后1h血糖明顯降低(P＜0.01)。 2.真皮基質(zhì)移植后大體觀察及組織學(xué)觀察 2.1大體觀察 術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)取材見真皮基質(zhì)與創(chuàng)面接觸緊密。第14天取材，實(shí)驗(yàn)組見包裹真皮基質(zhì)的筋膜層有豐富的血管網(wǎng)，密度大于對照組。 2.2組織學(xué)觀察 移植前隨機(jī)取部分sADMHE染色未見

4、任何細(xì)胞成分。術(shù)后第2d在A、B組移植片雙面淺層可見成纖維細(xì)胞及炎性細(xì)胞浸潤。第4dA、B組移植片內(nèi)血管內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)多于C、D組(P＜0.05)。第7dA、B組移植片雙面淺層可見新生血管形成，結(jié)構(gòu)完整。第14dA組和B組血管數(shù)量和管徑明顯大于C組和D組(P＜0.05)。第28d各組間血管數(shù)和管徑無明顯差異。 討論 皮膚替代物的血管生成是在血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(vascularendothelialgrowthfactor，

5、VEGF)的作用下，與創(chuàng)面上血管內(nèi)皮細(xì)胞上VEGF受體結(jié)合后，引起內(nèi)皮細(xì)胞分裂、增殖和遷移，增加血管通透性，促進(jìn)新生血管形成。血管內(nèi)皮細(xì)胞又與成纖維細(xì)胞相互作用來進(jìn)一步完成血管化過程。胰島素可以通過多種不同的信號途徑誘導(dǎo)VEGFmRNA表達(dá)，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖。并且胰島素對成纖維細(xì)胞的生長和膠原合成也有促進(jìn)作用，維持成纖維細(xì)胞活性。故對血管內(nèi)皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞都存在作用的胰島素就成為了我們研究的對象。為此我們設(shè)計(jì)了將sADM先植入機(jī)

6、體內(nèi)，而局部浸潤注射胰島素，利用胰島素促進(jìn)細(xì)胞分裂增殖、VEGF表達(dá)的作用，來促進(jìn)局部成纖維細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞在機(jī)體組織提供的三維環(huán)境中快速分裂增殖。而研究結(jié)果表明應(yīng)用小劑量胰島素可以明顯有效地促進(jìn)局部的成纖維細(xì)胞的增殖，并且向真皮基質(zhì)內(nèi)浸潤。這樣不但植入的真皮基質(zhì)具有了“活性”，而且使血管內(nèi)皮細(xì)胞在VEGF的作用下更加快速地在真皮基質(zhì)內(nèi)增殖。成纖維細(xì)胞還可分泌多種細(xì)胞因子、生長因子和細(xì)胞外基質(zhì)成分，從而增強(qiáng)真皮替代物的親和性，促進(jìn)血管