重度創(chuàng)傷后NF-kB、IL-6-IL-10變化與MODS的關(guān)系及微量元素干預(yù)作用的研究.pdf

1、背景與目的:
　　多器官功能障礙綜合征(MODS)指在嚴重創(chuàng)傷、感染和休克時,同時或相繼出現(xiàn)兩個或兩個以上器官、系統(tǒng)急性功能障礙的臨床綜合征,為嚴重創(chuàng)傷后主要的致死性并發(fā)癥之一,其高發(fā)生率和高死亡率一直是醫(yī)學(xué)界的一大難題。因目前MODS死亡尚無病理形態(tài)學(xué)診斷標準,所以亦是法醫(yī)病理學(xué)鑒定領(lǐng)域的一難題。Zn等TE在炎癥細胞激活,炎癥介質(zhì)代謝等炎癥反應(yīng)的發(fā)生、發(fā)展、調(diào)節(jié)過程中起重要作用。但是,目前創(chuàng)傷后TE急性缺乏與機體發(fā)生SIRS、M

2、ODS是否有關(guān),尚需進一步研究。本研究在以往建立家兔重度創(chuàng)傷致MOF模型基礎(chǔ)上,通過適量TE干預(yù),觀察血清IL-6/IL-10,脾淋巴細胞核內(nèi)NF-kB P65及MODS發(fā)生率、死亡率等相關(guān)指標,探討創(chuàng)傷后TE變化與創(chuàng)傷后炎癥反應(yīng)平衡,MODS發(fā)生的相關(guān)性,以期為嚴重創(chuàng)傷治療提供新思路,為法醫(yī)學(xué)死因和死亡機理分析提供理論依據(jù)。
　　材料與方法:
　　健康雄性純種新西蘭大白兔70只,體重2~2.5kg,隨機分為:
　?、?/p>

3、重傷組37只;
　?、谘a充組28只;
　?、壅φ战M5只,不損傷直接處死。
　?、芩劳鼋M12只,重傷組中傷后超過24h死亡的歸入死亡組。
　　所有創(chuàng)傷家兔模型均為ISS=27的肢體重度創(chuàng)傷模型。傷后1~5天,重傷組家兔予10％GS,補充組給予10%GS+安達美。各家兔均補液前采血,按傷前及傷后6h、1、3、6、9、14d時間點耳緣靜脈采血。存活家兔分別隨機于傷后1、3、6、9、14d頸動脈放血處死,每時間點5只

4、。各重要臟器行HE染色,免疫組化及Western-blot方法檢測脾臟NF-kB P65,石墨爐原子發(fā)光法檢測血清及脾臟內(nèi)Zn、Cu、Se、Mn含量,同時用ELISA法測血清IL-6及IL-10濃度。
　　結(jié)果:
　　家兔創(chuàng)傷后24h內(nèi)表現(xiàn)為拒食,體重在1周內(nèi)進行性下降10~20%,耳溫先下降后升高,耳緣血管先收縮貧血后擴張淤血。心跳、呼吸頻率均加快達80~120次/分。重傷組家兔死亡率為37.5%,補充組死亡率13.04%

5、。解剖所見,存活家兔各臟器形態(tài)學(xué)表現(xiàn)為不同程度的輕度淤血、腫脹,實質(zhì)細胞輕度水變性為主(顆粒性腫脹)。死亡家兔臟器淤血重,部分肺、肝表面可見散在細小灰白色感染灶;重要臟器實質(zhì)細胞高度水變性,彌漫炎性細胞浸潤;胸腺皮質(zhì)明顯變薄,髓質(zhì)擴大,胸腺小體增多。脾竇萎陷貧血、淋巴組織萎縮,多見大小形態(tài)不一的退變細胞和凋亡小體。
　　各創(chuàng)傷家兔血清AST、ALT、Cr、BUN變化趨勢較一致,均表現(xiàn)為傷后迅速升高,24h達高峰,然后逐漸恢復(fù)正常水

6、平。重傷組生化指標升高持續(xù)時間較補充組明顯延長,3d后仍未下降。死亡組家兔在死前時間點所測指標,6只肝腎指標均達衰竭診斷標準,另6只腎功能指標達衰竭診斷標準。
　　各創(chuàng)傷家兔血清Zn、Cu、Se、Mn變化趨勢基本一致,先下降后升高,其后再次下降,然后逐漸恢復(fù)正常,呈波浪式變化。傷后補充組Zn、Se、Mn平均濃度高于對照和死亡組,但仍低于傷前濃度,補充組波動范圍也小于重傷組。對照和補充組間Cu濃度無明顯區(qū)別,6-9d死亡的家兔血清C

7、u降低明顯。脾TE變化規(guī)律與血清中基本相似,呈波浪式變化趨勢,補充組TE含量較重傷組高。
　　創(chuàng)傷6h左右,各創(chuàng)傷家兔外周血WBC濃度有所下降,然后快速升高。傷后3-6d達到高峰值后下降,但死亡組繼續(xù)維持在高水平。傷后6h,PMN構(gòu)成比即明顯增高,傷后第9d后開始下降,死亡組則持續(xù)高水平。傷后血清IL-6、IL-10均波浪式變化,但IL-10波動較小。補充組IL-6平均值低于重傷組和死亡組,且波動范圍小,重傷組和死亡組波動范圍較大

8、。創(chuàng)傷后,脾細胞核內(nèi)NF-kB P65表達量增高,傷后6d達高峰值,然后開始下降,傷后9d達低谷后又開始增高。三組比較,補充組平均值最低,波動范圍最小。相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn),血清IL-6濃度與脾Zn含量呈負相關(guān),與脾細胞核內(nèi)P65量亦表現(xiàn)出負相關(guān)。脾細胞核內(nèi)P65表達量與脾Zn含量呈負相關(guān)。
　　結(jié)論:
　　1、建立了ISS=27的家兔肢體重度創(chuàng)傷模型,通過適當補充復(fù)合TE制劑,進一步證實了嚴重創(chuàng)傷后急性TE缺乏與MOF和死亡高發(fā)

9、生率相關(guān)。
　　2、本實驗通過對重度創(chuàng)傷后器官功能狀態(tài)及形態(tài)學(xué)相結(jié)合動態(tài)過程的觀察,以及前期工作基礎(chǔ)上,進一步證實了多臟器彌漫性炎細胞浸潤,實質(zhì)細胞高度水變性,局灶性壞死及胸腺和脾淋巴器官萎縮等應(yīng)是MODS死亡的病理學(xué)基礎(chǔ),為法醫(yī)病理學(xué)鑒定MOF死亡提供了參考依據(jù)。
　　3、本實驗提示,重度創(chuàng)傷后的TE急性缺乏損害機體免疫應(yīng)激反應(yīng)的調(diào)節(jié)能力,參與了創(chuàng)傷后SIRS、MODS的發(fā)生、發(fā)展。
　　4、本實驗提示,重度創(chuàng)傷后早