原發(fā)性甲狀旁腺功能亢進(jìn)癥的臨床資料分析及分子發(fā)病機(jī)制研究.pdf

1、【目的】本課題研究目的：①分析探討原發(fā)性甲狀旁腺功能亢進(jìn)癥（PHPT）臨床特征及其變遷；中西方PHPT的差異及原因；不同病理類型的PHPT的臨床差異。②研究PHPT的分子發(fā)病機(jī)制。 【方法】本課題研究主要方法：①回顧性分析瑞金醫(yī)院1956年～2005年50年間收治的PHPT患者的臨床資料特點(diǎn)；比較1956年～2001年與2001年～2005年兩個(gè)階段PHPT患者的臨床差異；與北京協(xié)和、香港地區(qū)、美國紐約及法國巴黎的PHPT臨床資

2、料作比較，尋找差異并分析可能的原因；2000年～2006年間的PHPT患者按病理分組，進(jìn)行臨床生化資料的比較分析。②應(yīng)用半定量及RT-PCR的方法，比較甲狀旁腺增生、腺瘤和癌的原癌基因cyclin D1的mRNA表達(dá)差異；應(yīng)用Western Blot的方法，比較甲狀旁腺增生、腺瘤和癌的cyclin D1和menin蛋白的表達(dá)差異；應(yīng)用免疫組化的方法比較甲狀旁腺增生、腺瘤和癌的cyclin D1蛋白表達(dá)差異及其上游的調(diào)控基因之一β-cat

3、enin蛋白的表達(dá)差異，分析兩者之間的關(guān)系；分析cyclin D1差異表達(dá)與臨床表型之間的關(guān)系。 【結(jié)果】通過對(duì)PHPT患者的臨床資料分析和甲狀旁腺腫瘤組織的分子生物學(xué)研究，具體結(jié)果如下： 1. 瑞金醫(yī)院1956年～2005年50年間，共160例PHPT患者資料,有明確病理診斷的151例,未手術(shù)的患者9例。其中甲狀旁腺單發(fā)腺瘤,占86.1％；多發(fā)腺瘤占2.7％；增生占4.6 ％；甲狀旁腺癌占5.3％；增生合并腺瘤占1.3

4、％。其中異位甲狀旁腺6例，4例為胸腺內(nèi)異位，1例為右胸鎖關(guān)節(jié)上異位，1例為甲狀腺內(nèi)異位。 PHPT患者的臨床特點(diǎn)如下：①首發(fā)癥狀的年齡為（39.02±15.82）歲(10～70歲)。明確診斷的平均年齡為（46.25 ± 13.59）歲。②出現(xiàn)首發(fā)癥狀到明確診斷及時(shí)手術(shù)的時(shí)間間隔長，（0.02～27）年，中位數(shù)4年。③首診科室分布廣泛，首發(fā)癥狀表現(xiàn)豐富多樣。④臨床類型以骨型、骨腎混合型為主,有骨質(zhì)病變者達(dá)80％～90％以上, 98

5、.1％以上患者有癥狀,臨床表現(xiàn)復(fù)雜。⑤甲狀旁腺腫瘤體積較大,直徑多大于1cm。 1956年～2001年vs.2001年～2005年P(guān)HPT患者，首發(fā)癥狀，腎型的比例為6.9％vs.30％、高鈣型比例1.1％vs.20％，顯著上升；同時(shí)骨型和腎骨混合型的比例從51.1％、41.1％分別下降到22.9％，均顯著下降；2001年～2005年無癥狀型的比例占4.3％。臨床表現(xiàn)上，1956年～2001年以骨吸收病變?yōu)橹?2.2％，腎型57

6、.8％，骨腎混合型51.1％；2001年～2005年以骨骼病變90％，腎骨混合型47.1％，無癥狀型4.3％，腎型和高鈣表現(xiàn)各占82.9％和64.3％。 25（OH）VitD3低于平均值（35.93±23.11）nmol/L的患者有更高的血鈣、血AKP及骨AKP，骨骼病變更嚴(yán)重。 不同病理類型的臨床差異：①增生組病程最長，平均(8.53±3.18)年；癌組病程最短，平均(2.14±0.82)年。②臨床表現(xiàn)方面，腺瘤組泌尿

7、系統(tǒng)病變比例顯著高于其他兩組；其他癥狀三組無明顯差異。③癌組較增生及腺瘤組患者有更高的血鈣、血PTH、血肌酐、更快的血沉和更大、更重的腫瘤。 ２. RT- PCR分析（腺瘤+癌）組原癌基因cyclin D1的mRNA表達(dá)量是增生組的2.53倍，從mRNA水平證明原癌基因cyclin D1的過量表達(dá)是腫瘤組織過度增殖的原因之一。免疫組化研究結(jié)果cyclin D1蛋白的過度表達(dá)率為30.77％。Western研究結(jié)果顯示：23.07

8、％的甲狀旁腺腺瘤有cyclin D1過表達(dá)。抑癌基因MEN1的產(chǎn)物menin蛋白表達(dá)缺失的有2例，占7.7％，該2例患者同時(shí)有cyclin D1基因表達(dá)下調(diào)。 原癌基因cyclin D1 的表達(dá)差異與臨床表型有關(guān)。Cyclin D1過度表達(dá)的患者起病年齡年輕，平均（39.50±11.99）歲，血鈣、血PTH、血AKP均明顯低于cyclin D1未有過表達(dá)的患者。其中起病年齡和血AKP有顯著差異。Cyclin D1過度表達(dá)的患者，

9、骨密度下降的程度輕，即骨骼病變的程度輕。 本組研究未發(fā)現(xiàn)cyclin D1上游β-catenin基因Exon3任何突變形式和甲狀旁腺腫瘤組織的HRPT2基因Exon1、2、7任何突變形式。 【結(jié)論】經(jīng)過臨床分析和實(shí)驗(yàn)室研究，得出如下結(jié)論： 1.臨床資料分析 （1）我院PHPT患者起病年齡年輕，病程長，首發(fā)癥狀多樣，臨床表現(xiàn)以骨骼病變、骨腎混合表現(xiàn)為主，生化指標(biāo)變化嚴(yán)重，表現(xiàn)為傳統(tǒng)的PHPT臨床特點(diǎn)，與發(fā)達(dá)

10、地區(qū)及西方國家該病現(xiàn)代的臨床表現(xiàn)以無癥狀型為主有較大差異。 （2）盡管在首發(fā)癥狀上，近5年來骨型和腎骨混合型比例明顯下降，腎型與高鈣型比例上升，但由于患者病程很長，所以和過去的45年相比。在臨床表現(xiàn)上仍然以骨骼病變?yōu)橹?，其后依次為泌尿系統(tǒng)的表現(xiàn)和高鈣癥狀。 （3）25（OH）VitD3水平偏低的PHPT患者骨質(zhì)流失更多，骨密度降低程度及骨骼病變更嚴(yán)重，是PHPT病情更嚴(yán)重的危險(xiǎn)因素。 （4）營養(yǎng)差異（我國PHPT

11、患者25（OH）VitD3和鈣營養(yǎng)相對(duì)缺乏）和對(duì)原發(fā)性甲狀旁腺功能亢進(jìn)癥的診治知識(shí)和技術(shù)的普及程度造成當(dāng)代中西方甲旁亢臨床表現(xiàn)的差異。 2.分子發(fā)病機(jī)制研究 （1）本研究從mRNA水平，蛋白質(zhì)水平，揭示了23％～30％的原發(fā)性甲狀旁腺腺瘤患者存在原癌基因cyclin D1 的過度表達(dá)，該現(xiàn)象與甲狀旁腺腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，是其重要的分子發(fā)病機(jī)制之一，并與臨床上骨骼病變的嚴(yán)重程度相關(guān)。 （2）抑癌基因MEN1的產(chǎn)