原發(fā)性甲狀旁腺功能亢進癥的臨床與分子發(fā)病機制研究.pdf

1、目的：隨著血鈣和血清甲狀旁腺激素(PTH)測定的普及以及臨床醫(yī)生對原發(fā)性甲狀旁腺功能亢進癥認識的深入，該病的發(fā)病率日益增高。但不清楚近十年來我國原發(fā)性甲旁亢的現(xiàn)狀如何。甲狀旁腺癌雖然少見，但臨床表現(xiàn)更重，死亡率很高。甲狀旁腺腫瘤的確切發(fā)病機制并未明了。因此本研究擬通過分析原發(fā)性甲旁亢的臨床表現(xiàn)和分子生物學改變，比較良惡性腫瘤間的差異。總結(jié)我國原發(fā)性甲旁亢的現(xiàn)狀，從遺傳學和表觀遺傳學角度探討甲狀旁腺腫瘤特別是甲狀旁腺癌可能的發(fā)病機制。

2、r>　　 方法：分析2000年至2010年間在本科就診的確診為原發(fā)性甲旁亢患者的臨床生化以及病理資料。選取良惡性腫瘤組織標本，用MLPA方法對39個腫瘤候選基因進行基因拷貝數(shù)變異分析，探討基因拷貝數(shù)變異在良惡性甲狀旁腺腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用。以甲基化特異性定量PCR方法探討良惡性甲狀旁腺腫瘤中Wnt信號通路相關基因DNA甲基化狀態(tài)。運用ChIP技術(shù)探討良惡性甲狀旁腺腫瘤中Wnt信號通路相關基因組蛋白H3K4以及H3K9甲基化狀態(tài)。并用r

3、ealtime PCR以及免疫組化分別驗證上述結(jié)果對靶基因表達以及蛋白表達的影響。
　　 結(jié)果：就診我科的原發(fā)性甲旁亢患者逐年增加，無癥狀的原發(fā)性甲旁亢比例從2000年無此類患者增至2010年的50％。但仍以有癥狀的原發(fā)性甲旁亢為主，占病人總數(shù)的66％。起病年齡51.26±15.59歲。病理類型主要為腺瘤，腺癌的比例占5.96％。血清PTH與血鈣(r=0.585)，腫瘤大小(r=0.441)呈正相關(P<0.001)，與骨密度以

4、及血紅蛋白濃度負相關(r=-0.301至-0.469，P<0.001)，能很好的反映疾病嚴重程度。86.8％的原發(fā)性甲旁亢患者合并維生素D缺乏。原發(fā)性甲旁亢術(shù)后1月時血清PTH升至最高，約1年回復至正常范圍內(nèi)。原發(fā)性甲旁亢患者常伴有甘油三酯升高(1.95±1.75mmol/l)，餐后兩小時血糖升高(8.07±2.21 mmol/l)，有47.39％的患者合并有高血壓。甲狀旁腺腺癌患者較甲狀旁腺腺瘤的患者病程更短(中位病程4個月vs13個

5、月，P=0.004)，血鈣更高(中位血鈣3.28mmol/l vs2.89mmol/l，P<0.001)，血清PTH水平更高(中位血清PTH1643pg/dl vs351.4pg/dl，P<0.001)以及腫瘤體積更大(3.57±1.30cm vs2.50±1.19cm，P=0.037)。良惡性甲狀旁腺組織中均存在基因拷貝數(shù)變異(5.79個vs7.86個)。CCND1基因拷貝數(shù)增加在甲狀旁腺癌組織中較甲狀旁腺腺瘤組織中多見(71％vs2

6、1％)。良惡性甲狀旁腺腫瘤組織，Wnt信號通路相關基因DNA甲基化異常很常見。惡性甲狀旁腺腫瘤組織SFRP2基因DNA甲基化水平明顯高于良性組織(28.16±2.01％vs6.01±3.98％，P=0.038)，SFRP2基因啟動子區(qū)H3K9二甲基化狀態(tài)惡性組顯著高于良性組(P=0.039)。SFRP2基因DNA甲基化以及組蛋白H3K9甲基化可共同作用，抑制SFRP2基因轉(zhuǎn)錄，減少SFRP2基因mRNA表達，激活Wnt信號通路，從而促進