苜蓿青貯接種菌復(fù)合系的構(gòu)建及其在青貯過程中的作用機(jī)理.pdf

1、紫花苜蓿(MedicagosativaL.下簡稱苜蓿)是我國第一大栽培牧草，重要的飼料蛋白源，目前栽培面積約為280萬hm2。青貯是保存苜蓿鮮度和營養(yǎng)的好方法。但苜蓿蛋白質(zhì)含量高，糖含量低，青貯易失敗。解決高效、低成本的苜蓿青貯技術(shù)對我國畜牧業(yè)的穩(wěn)定發(fā)展和確保糧食安全具有重要意義。乳酸菌作為接種劑一直得到重視，但純培養(yǎng)菌接種到未滅菌材料后效果不穩(wěn)定，學(xué)術(shù)界一直對此有爭論。因此本研究的目的是擺脫傳統(tǒng)的純培養(yǎng)，優(yōu)化組合包括難培養(yǎng)微生物種在內(nèi)

2、的自然界多樣的微生物，構(gòu)建高效、穩(wěn)定而抗逆性強(qiáng)的乳酸菌復(fù)合系，進(jìn)而結(jié)合傳統(tǒng)技術(shù)和現(xiàn)代分子生態(tài)學(xué)技術(shù)研究復(fù)合系對苜蓿青貯的促進(jìn)效果及苜蓿發(fā)酵中的作用機(jī)理，以期為苜蓿青貯難題的解決和我國優(yōu)質(zhì)、高效青貯菌劑的開發(fā)提供理論依據(jù)和技術(shù)基礎(chǔ)。本研究以pH降低迅速、穩(wěn)定和L(+)—乳酸積累量多為指標(biāo)，通過連續(xù)的限制性培養(yǎng)，從發(fā)酵飼料、青貯苜蓿及乳酸菌制劑中分別篩選出Al2、Ru2、Li6三組菌系。該三組菌系均pH下降迅速，各代之間pH值動(dòng)態(tài)穩(wěn)定；經(jīng)G

3、CMS測定結(jié)果，發(fā)酵液中含有較高的乙酸、乳酸，還有少量甲酸、丙酸等揮發(fā)性脂肪酸及丁二醇、乙酸乙酯、異丁醛、乙醛、乙酰胺等風(fēng)味物質(zhì)；在上述代謝產(chǎn)物中乙酸和乳酸占總代謝物的98％以上，尤其是L(+)—乳酸的比率高達(dá)60～70％。用傳統(tǒng)的純化培養(yǎng)技術(shù)、變性梯度凝膠電泳(DGGE)以及16SrDNA克隆文庫等分子生態(tài)學(xué)技術(shù)相結(jié)合分析了Al2、Ru2這2組菌系的組成多樣性，結(jié)果由Al2復(fù)合系檢測出7株乳酸桿菌，其中3株可培養(yǎng)，4株未能分離；Ru2

4、復(fù)合系由2種可培養(yǎng)，1種未能分離的乳桿菌組成。通過16SrDNA的DGGE和克隆文庫分析證明，Al2中的優(yōu)勢菌為Lactobacillusplantarum和Lactobacilluskimchii，Ru2中的優(yōu)勢菌為Lactobacillusplantarum和Lactobacilluscasei。將Al2和Ru2復(fù)合系接種到苜蓿的發(fā)酵實(shí)驗(yàn)證明，2復(fù)合系均能比不接菌對照明顯加快pH下降，提高乳酸含量，降低氨態(tài)氮的產(chǎn)生而明顯改善青貯飼料