糖尿病豬冠脈支架術(shù)后再狹窄發(fā)生中Cdc42和Rac1促氧化應(yīng)激機(jī)制的研究.pdf

1、背景：糖尿病患者冠狀動脈藥物支架植入術(shù)后支架內(nèi)再狹窄（ISR）發(fā)生率明顯高于非糖尿病患者,但發(fā)生機(jī)制不明。前期研究中我們建立了糖尿病冠狀動脈雷帕霉素支架術(shù)后ISR 的小型豬模型。飼養(yǎng)6 個月后處死模型。采集支架血管段并分離內(nèi)膜。對典型ISR 和非ISR 血管段內(nèi)膜組織進(jìn)行二維-差異凝膠電泳（2D-DIGE）和質(zhì)譜檢測的蛋白組學(xué)研究。發(fā)現(xiàn)ISR 組織中十余種蛋白水平顯著升高。這些蛋白與血管結(jié)構(gòu)調(diào)節(jié)、自身代謝和氧化應(yīng)激等通路有關(guān)。分析推測這

2、些通路上游與小G 蛋白調(diào)控有關(guān)。迄今，對小G 蛋白中Rac1、Cdc42 成員與氧化應(yīng)激的關(guān)系了解還很有限。
　　 目的：探討Rac1、Cdc42 蛋白對平滑肌細(xì)胞氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)調(diào)節(jié)作用，從而在體外實驗中闡明小G 蛋白對糖尿病冠狀動脈藥物支架置入術(shù)后ISR 發(fā)生的促進(jìn)作用。
　　 方法和結(jié)果: 運(yùn)用Western Blot 比較驗證糖尿病豬冠脈ISR 和非ISR 血管段平滑肌內(nèi)膜組織的蛋白表達(dá)。發(fā)現(xiàn)小G 蛋白Cdc4

3、2 和Rac1 在糖尿病ISR 組織中明顯增高。培養(yǎng)原代大鼠主動脈平滑肌細(xì)胞（rASMCs），運(yùn)用逆轉(zhuǎn)錄病毒體系建立穩(wěn)定表達(dá)Cdc42、Rac1 基因和其突變體的rSMCs 細(xì)胞株。以Carboxy-H2DCFDA 熒光檢測活細(xì)胞內(nèi)活性氧含量。結(jié)果顯示，野生型和活化突變型Cdc42、Rac1、Cdc42V12 和Rac1V12 均誘發(fā)了血管平滑肌細(xì)胞的氧化應(yīng)激狀態(tài)，而高糖培養(yǎng)或RAGE 配體刺激情況下更加劇這些小G 蛋白的誘導(dǎo)效應(yīng)。同樣

4、，Realtime PCR 檢測發(fā)現(xiàn)野生型和活化突變型Cdc42 及Rac1 能促進(jìn)了NADPH 氧化酶和ISR 相關(guān)炎癥因子和血管重構(gòu)因子的表達(dá)，抑制了氧自由基清除酶的表達(dá)。但是，抑制突變型Cdc42N17 和Rac1N17 與野生型相比則對上述現(xiàn)象有抑制效應(yīng)。
　　 結(jié)論: 小G 蛋白Cdc42 和Rac1 通過調(diào)節(jié)NADPH 氧化酶和抗氧化酶的表達(dá)來影響血管平滑肌細(xì)胞的氧化應(yīng)激狀態(tài)，從而影響細(xì)胞炎癥因子的表達(dá)，促進(jìn)血管炎癥