蛋白質(zhì)微陣列技術(shù)在檢測TORCH感染中的實驗研究.pdf

1、目的：對玻片表面六種不同修飾方法進(jìn)行比較，探討制備蛋白質(zhì)微陣列的合適的玻片表面修飾方法；研究分別采用熒光素和膠體金為檢測信號制備TORCH感染檢測蛋白質(zhì)微陣列。 方法：以玻片為基質(zhì)，采用六種不同方法對玻片表面進(jìn)行修飾，對其接觸角進(jìn)行測量，采用原子力學(xué)顯微鏡對其表面進(jìn)行表征，通過將不同濃度的人IgM點樣于修飾后的玻片制備蛋白質(zhì)微陣列，比較不同修飾方法對蛋白質(zhì)的固定效率，以及檢測的線性范圍、背景等；采用玻片表面修飾瓊脂糖膜制備蛋白質(zhì)

2、微陣列，以生物素標(biāo)記二抗，利用生物素和鏈霉親和素的強(qiáng)大親和力，檢測血清中TORCH IgM抗體；抗原點樣于被瓊脂糖膜修飾的玻片表面，將膠體金標(biāo)記的抗體和微陣列進(jìn)行孵育，采用銀加強(qiáng)放大微陣列信號，肉眼觀察或普通的平板掃描儀記錄結(jié)果。 結(jié)果：測量修飾后的玻片的接觸角，對玻片表面進(jìn)行表征，對蛋白質(zhì)的固定效率、固定的效果進(jìn)行綜合分析，瓊脂糖修飾玻片的表面接觸角較大，其表面不儀有多孔結(jié)構(gòu)，而且有一定厚度，結(jié)合蛋白質(zhì)分子的能力最大，其點的

3、變異度較小，沒有拖尾現(xiàn)象，點較圓潤，背景較低；以熒光為檢測信號，基于生物素一鏈霉親和素系統(tǒng)制備的TORCH感染檢測蛋白質(zhì)微陣列，IgM的最低檢出量為0.25pg，蛋白質(zhì)微陣列和ELISA法同時對CMV、RV、TOX和HSV II IgM抗體總的檢測診斷符合率為97.1﹪；采用免疫金銀染色法制備的TORCH感染檢測蛋白質(zhì)微陣列，IgM的最低檢出量為12.5pg，微陣列和ELISA法同時對CMV、RV、TOX和HSVIIIgM抗體總的檢測診