亞洲帶絳蟲(chóng)實(shí)驗(yàn)感染乳豬肝臟的蛋白質(zhì)組研究.pdf

1、目的：
　　采用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)和方法研究亞洲帶絳蟲(chóng)實(shí)驗(yàn)感染乳豬后15 d、75 d幼蟲(chóng)寄生處肝臟組織與對(duì)照組肝組織的蛋白質(zhì)表達(dá)差異，為進(jìn)一步研究亞洲帶絳蟲(chóng)感染致乳豬肝損傷的分子機(jī)制提供基礎(chǔ)資料。
　　方法:
　　1.絳蟲(chóng)標(biāo)本采集及蟲(chóng)卵收集：將采自貴州省都勻市良畝鄉(xiāng)的亞洲帶絳蟲(chóng)孕節(jié)解剖后，以生理鹽水反復(fù)清洗并離心收集蟲(chóng)卵。2.乳豬實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的建立及肝臟樣本采集：20日齡約克施格雜交乳豬12頭隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組各6頭

2、，實(shí)驗(yàn)組以定量蟲(chóng)卵15萬(wàn)個(gè)/頭灌胃感染。于感染后第15 d和第75 d解剖乳豬，取實(shí)驗(yàn)組囊尾蚴寄生處肝組織和對(duì)照組對(duì)應(yīng)部位肝組織。3.iTRAQ技術(shù)檢測(cè)分析實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組乳豬肝臟的差異蛋白表達(dá)：主要步驟：蛋白質(zhì)制備、酶解和肽段定量、肽段標(biāo)記、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析、Mascot軟件查庫(kù)鑒定及定量分析和生物信息學(xué)分析。4.部分差異蛋白的驗(yàn)證：運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量 PCR、免疫印跡方法和免疫組織化學(xué)技術(shù)對(duì)部分差異蛋白進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證。
　　

3、結(jié)果：
　　1.根據(jù)一般形態(tài)學(xué)特征和分子生物學(xué)鑒定結(jié)果，證實(shí)2條都勻采集的帶絳蟲(chóng)為亞洲帶絳蟲(chóng)。2.實(shí)驗(yàn)組6頭乳豬均感染了亞洲帶絳蟲(chóng)囊尾蚴，感染率為100%。囊尾蚴只存在于乳豬肝臟，其它組織未檢獲。3. iTRAQ分析結(jié)果顯示感染后第15 d實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較共有187個(gè)蛋白質(zhì)（92個(gè)未知）有顯著差異；感染后第75 d實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較共有158個(gè)蛋白質(zhì)（72個(gè)未知）有顯著差異。4.驗(yàn)證結(jié)果顯示感染后第15 d，實(shí)驗(yàn)組半胱氨酸天冬氨

4、酸蛋白酶3（Cysteine aspartyl proteinase3，Caspase-3）mRNA和蛋白表達(dá)水平均低于對(duì)照組（P<0.05，P<0.01），感染后第75 d，實(shí)驗(yàn)組Caspase-3 mRNA和蛋白表達(dá)水平較對(duì)照組無(wú)明顯變化（P>0.05）；感染后第15 d和75 d，實(shí)驗(yàn)組膜聯(lián)蛋白A5（Annexin A5，Anxa5）和甲硫氨酰氨肽酶2（Methionine aminopeptidase2,Metap2）mRNA和

5、蛋白表達(dá)水平均高于對(duì)照組（P<0.05，P<0.01），而實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞色素P4501A1（CytochromeP4501A1，Cyp1a1）mRNA和蛋白表達(dá)水平均低于對(duì)照組（P<0.05，P<0.01）；免疫組化結(jié)果顯示 Caspase-3、Anxa5陽(yáng)性染色主要定位在肝細(xì)胞胞質(zhì)中，呈黃色或棕黃色。
　　結(jié)論：
　　1. iTRAQ技術(shù)檢測(cè)到了亞洲帶絳蟲(chóng)實(shí)驗(yàn)感染乳豬肝臟的大量差異蛋白表達(dá)，為進(jìn)一步研究亞洲帶絳蟲(chóng)致中間宿主乳豬