阿散酸對仔豬肝臟蛋白質(zhì)表達的影響.pdf

1、有機砷制劑(如阿散酸等)作為飼料添加劑已經(jīng)得到廣泛應(yīng)用。動物對砷有蓄積作用,長期飼喂阿散酸,不僅會導(dǎo)致動物源性食品中砷含量殘留超標(biāo),而且引發(fā)土壤生態(tài)污染。動物性食品的獸藥殘留問題已經(jīng)引起了國內(nèi)外的廣泛關(guān)注,但現(xiàn)有的研究主要集中在獸藥殘留的快速篩選、檢測等驗證性的分析方法上,對獸藥殘留在畜禽體內(nèi)引發(fā)各種變化的生物學(xué)機制目前仍缺乏足夠和有效的研究。蛋白質(zhì)組學(xué)的研究成為探索生物體各種動態(tài)的生物學(xué)機制的有效手段,雙向電泳和質(zhì)譜技術(shù)作為蛋白質(zhì)組學(xué)

2、分析的重要工具,可以直觀快速地發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)表達的差異和變化。
　　 本實驗運用雙向電泳技術(shù)對仔豬肝臟的蛋白質(zhì)表達譜進行分析,以探索阿散酸在豬體內(nèi)作用的生物學(xué)機制,及對豬的影響。期望能夠直觀地反映有機砷制劑在畜禽體內(nèi)的代謝情況以及控制該獸藥在豬飼養(yǎng)過程中的科學(xué)應(yīng)用提供新的思路。
　　 1、分別對豬肝臟的電泳參數(shù)、樣品處理、染色方法、凝膠孔徑、蛋白上樣量、IPG膠條的選擇等方面對雙向電泳體系進行了優(yōu)化,建立了豬肝臟蛋白質(zhì)的雙向

3、電泳體系。確定雙向電泳條件為:超速離心法,Clean up試劑盒處理,17 cm pH5-8 IPG膠條,樣品蛋白上樣量120μ L。經(jīng)上述條件優(yōu)化后,建立的雙向電泳圖譜的重復(fù)性良好,匹配率達到76％±1.7％,蛋白點有1412±8個,已經(jīng)達到后續(xù)實驗分析的要求。
　　 2、參照全盲法,對各種不同的豬肝臟樣品進行準(zhǔn)確性和重復(fù)性試驗,樣品的匹配率都在70％以上,且圖譜中蛋白點的相對遷移率都在實驗室的控制標(biāo)準(zhǔn)之內(nèi),可以篩選出既具有統(tǒng)

4、計學(xué)意義又具有量分析意義的蛋白點,也可以用于區(qū)分不同的豬肝臟樣品。表明本實驗建立的豬肝臟蛋白質(zhì)雙向電泳體系能滿足不同豬肝臟樣品的雙向電泳分析。
　　 3、單因子完全隨機化實驗下阿散酸對仔豬肝臟蛋白質(zhì)的影響。得到了具有重復(fù)性和穩(wěn)定性良好的仔豬肝臟蛋白質(zhì)雙向電泳圖譜,針對實驗組和對照組仔豬肝臟蛋白質(zhì)雙向電泳表達圖譜比較,用PDQuest軟件進行差異分析,結(jié)果得到兼具統(tǒng)計學(xué)意義和分析意義的差異蛋白點共13個,均為上調(diào)蛋白質(zhì)。
　

5、　 4、對實驗組和對照組仔豬肝臟蛋白質(zhì)雙向電泳圖的13個差異蛋白點進行質(zhì)譜MS+MS/MS分析,用MASCOT軟件搜索與之相匹配的蛋白質(zhì),成功鑒定12個點,得到10種蛋白質(zhì),分別為分別為ChainB,Refined1.8 Angstroms Resolution Crystal Structure Of PorcineEpsilon-Trypsin,Rho GDP dissociation inhibitor alpha,PREDIC

6、TED:hypothetical protein LOC100512997,PREDICTED:26S proteasomenon-ATPase regulatory subunit13-like,PREDICTED:LOW QUALITYPROTEIN:heat shock cognate71kDa protein-like.PREDICTED:synapticvesicle membrane protein VAT-1.cytosk