APAF-1基因和S100A8基因在喉鱗癌發(fā)生中作用機(jī)制的研究.pdf

1、 本文首先研究APAF-1在喉癌中的表達(dá)、缺失及啟動(dòng)子甲基化情況，探討它與喉鱗癌發(fā)生的相關(guān)性。方法是應(yīng)用半定量RT-PCR方法、免疫組化分析Apaf-1表達(dá)，雜合性丟失(LOH)分析喉鱗癌病人APAF-1基因所在的12q22-23區(qū)域缺失情況，并用甲基化特異性PCR對(duì)該基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化情況進(jìn)行研究。結(jié)果顯示:首次證實(shí)APAF-1與喉鱗癌相關(guān)，在喉鱗癌中APAF-1表達(dá)下調(diào)。且啟動(dòng)子甲基化是喉鱗癌APAF-1基因表達(dá)下調(diào)的主要原因。

2、 然后研究S100A8基因與喉癌發(fā)生的關(guān)系,以揭示炎癥在喉癌發(fā)生中的作用。 方法：RT-PCR檢測S100A8、BCL-2基因表達(dá)(方法同第一部分)。Western Blot檢測S100A8蛋白表達(dá)；免疫組化染色分析喉鱗癌組織中S100A8蛋白表達(dá)(方法同第一部分)；RNAi方法研究S100A8基因?qū)ep2細(xì)胞影響；Transwell檢測細(xì)胞體外侵襲力，軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn)檢測Hep2細(xì)胞的致瘤性；TUNEL和流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋