內(nèi)含子源性27堿基microRNA對內(nèi)皮型一氧化氮合酶表達(dá)影響及其分子機(jī)制研究.pdf

1、J18117南華大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人聲明，所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了論文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得南華大學(xué)或其他單位的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我共同工作的同志對本研究所作的貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明。本人完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。作者簽名：南華大學(xué)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文是本人在南華大學(xué)

2、攻讀碩士學(xué)位期間在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成的學(xué)位論文。本論文的研究成果歸南華大學(xué)所有，本論文的研究內(nèi)容不得以其它單位的名義發(fā)表。本人同意南華大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文，允許學(xué)位論文被查閱和借閱；學(xué)?？梢怨紝W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容，可以采用復(fù)印、縮印或其它手段保留學(xué)位論文；學(xué)?？筛鶕?jù)國家或湖南省有關(guān)部門規(guī)定送交學(xué)位論文。同意學(xué)校將論文加入《中國優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫》，并按《中國優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫出

3、版章程》規(guī)定享受相關(guān)權(quán)益。同意授權(quán)中國科學(xué)信息技術(shù)研究所將本學(xué)位論文收錄到《中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫》，并通過網(wǎng)絡(luò)向社會公眾提供信息服務(wù)。對于涉密的學(xué)位論文，解密后適用該授權(quán)。作者簽名：沙咱’|裊踢每毛其1日導(dǎo)師簽名：Kb。L加07年6月f日內(nèi)含子源性27堿基microRNA對內(nèi)皮型一氧化氮合酶表達(dá)影響及其分子機(jī)制研究碩士研究生：吳建勇導(dǎo)師：歐和生教授中文摘要目的：研究內(nèi)含子源性微核糖核酸(microRNA)對內(nèi)皮型一氧化氮合酶(endo

4、thelialnitricoxidesynthase，eNOS)蛋白及mRNA表達(dá)的調(diào)節(jié)作用，探討microRNA表達(dá)對人血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖的影響及其分子機(jī)制。方法：用人工合成的27堿基microRNA相應(yīng)的雙鏈互補(bǔ)DNA片段，插入pSilencervM31HIneo表達(dá)載體，經(jīng)測序鑒定后作為microRNA的表達(dá)質(zhì)粒；用脂質(zhì)體將27堿基microRNA高表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染進(jìn)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(Humanumbilicalveinendothel

5、ialcells。HUVEC)，經(jīng)G418篩選獲得陽性克隆后，用Northernblotting驗證microRNA在穩(wěn)定細(xì)胞系中表達(dá)，以建立microRNA高表達(dá)為遺傳背景的細(xì)胞系。用RTPCR技術(shù)和Westernblotting分別檢測該細(xì)胞系中eNOSmRNA和蛋白表達(dá)情況。用Westernblotting檢測細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)改變。用MTT法檢測人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖的變化情況。結(jié)果：DNA測序分析表明插入載體的27堿基micr

6、oRNA無讀碼框移位和突變，Northernblotting驗證27堿基microRNA在細(xì)胞系高表達(dá)，表明質(zhì)粒構(gòu)建成功；Westemblotting結(jié)果顯示27堿基microRNA能夠減少eNOS蛋白質(zhì)，RTPCR方法分析顯示eNOSmRNA水平降低，表明27堿基microRNA抑制eNOS的表達(dá)同時發(fā)生在mRNA和蛋白表達(dá)水平。用Westernblotting檢測轉(zhuǎn)錄因子Spl、AP1，結(jié)果表明它們在27堿基microRNA高表達(dá)的