人胃癌細(xì)胞腫瘤相關(guān)基因的表達(dá)與甲基化調(diào)控的初步研究.pdf

1、胃癌是威脅中國人民健康的最主要的腫瘤之一.胃癌的發(fā)生同其它腫瘤一樣,有癌基因的過度表達(dá)和/或抑癌基因的失活.而在基因表達(dá)調(diào)控中,DNA甲基化在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中扮演著極其重要的角色,甲基化異常是通過影響癌基因和抑癌基因的表達(dá)以及基因組的穩(wěn)定性而參與腫瘤的發(fā)生與發(fā)展的.該研究旨在闡明胃癌的發(fā)生中多種抑癌基因和癌基因的甲基化情況,以期為進(jìn)一步深入探索通過改變抑癌基因的甲基化而為胃癌治療提供新的方法.我們培養(yǎng)人胃癌細(xì)胞株MKN-45和HGC-

2、27兩種細(xì)胞,在MTT確定去甲基化制劑5-氮脫氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,5-aza-dC)濃度和時(shí)間對細(xì)胞生長活力沒有影響后,分別以2μmol/L、5μmol/L和10μmol/L等不同濃度分別干預(yù)24h和72h,然后提取其DNA、RNA和蛋白質(zhì),分別以RT-PCR和Western blotting檢測DNA甲基化酶1(DNAemthylatransferase1,DNMT1)表達(dá);用RT-PCR的方法檢測p

3、16<'INK4A>、p21 <'WAF1>、p53、p73、c-Ha-ras和c-myc等多種基因的表達(dá)情況.同時(shí)以流式細(xì)胞儀分析MKN-45和HGC-27的細(xì)胞周期,DNA分析則通過亞硫酸氫鹽修飾測序和甲基化特異性PCR的方法檢測p16<'INK4A>基因啟動(dòng)子區(qū)和c-myc基因甲基化的情況.該研究證實(shí)人胃癌細(xì)胞系MKN-45和HGC-27中,p16<'INK4A>啟動(dòng)子區(qū)的甲基化是其在胃癌細(xì)胞系表達(dá)減弱的主要原因.p16<'INK