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文檔簡介
1、目的：對宮頸癌的篩查有助于疾病早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷、早期治療。為此我們提出了一種可用于宮頸癌篩查的檢測方法，該方法可快速檢測宮頸癌標志物P16INK4A。
方法：構(gòu)建重組質(zhì)粒p16ink4a-pET28a，在大腸桿菌中表達P16INK4A，利用親和層析純化P16INK4A，最后利用western blot驗證P16INK4A。以純化的重組蛋白P16INK4A作靶蛋白，利用SELEX技術(shù)篩選其特異性適配體，通過分析親和力最終選出一
2、條高親和力、高特異性的適配體。枸櫞酸鈉還原法制備13nm納米金顆粒并表征。建立基于納米金和適配體的分析方法，并對其進行方法學(xué)的考察。
結(jié)果：重組蛋白P16INK4A在大腸桿菌中成功表達，親和層析制備了高純度的重組蛋白并鑒定為正確。篩選出一條Kd值為5.624nM的高親和力的適配體并驗證可以和重組蛋白結(jié)合。制備出分散良好、大小均一13nm納米金。建立了基于納米金和適配體的分析方法。該方法的檢測限是4.52nM，定量限是12.5n
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