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文檔簡介
1、目的:
觀察氯化鋰對缺氧PC12細胞凋亡的影響,明確氯化鋰的腦保護作用,為氯化鋰用于臨床缺血缺氧性疾病的治療提供理論依據(jù)及研究方向。
方法:
PC12細胞株由上海市中科院細胞庫提供,培養(yǎng)于含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中。當細胞融合度達到70%-80%時傳代,取生長對數(shù)期細胞用于實驗。將PC12細胞在缺氧環(huán)境下培養(yǎng)0h,12h,24h,36h后采用Annexin-v FITC/PI雙染流式細胞分析儀檢測細
2、胞凋亡率;0h為對照組,12h,24h,36h為實驗組,觀察凋亡高峰時間用于后期實驗。
PC12細胞分為:A正常組,B缺氧組,C缺氧+氯化鋰治療組,D單獨氯化鋰組,四組不同方式培養(yǎng);采用Annexin-v FITC/PI雙染流式細胞分析儀檢測細胞不同處理條件凋亡率的改變;CAM活細胞染色檢測細胞存活率;RT-PCR檢測Caspase-3,α5、β1整合素mRNA表達。
結(jié)果:
1、實驗組(12h,24h和3
3、6h) PC12細胞凋亡率及死亡率明顯高于對照組,[23.12±0.048,34.91±0.104,36.58±0.092與4.11±0.081;P<0.05];36h組凋亡率較24h組稍有增加,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義,[34.91±0.104與36.58±0.092; P>0.05]。
2、缺氧引起PC12細胞凋亡率增加,[34.91±0.117與3.11±0.059; P<0.05]和存活率的顯著降低[17.71±0.031與
4、90.11±0.035; P<0.05],同時引起PC12細胞表面表達Caspase-3增加和α5、β1整合素明顯減少。在缺氧前,應(yīng)用10 mmol/l氯化鋰預(yù)處理30min可阻斷缺氧引起的PC12細胞存活率的降低[17.71±0.031與57.58±0.066; P<0.05],顯著降低缺氧引起的PC12細胞凋亡率的增加[34.91±0.021與21.72±0.081; P<0.05],并阻斷缺氧引起的PC12細胞表達Caspase-
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