懸浮力學狀態(tài)通過誘導整合素β1表達上調(diào)促進乳腺腫瘤細胞的外滲.pdf

1、腫瘤轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的重要生物學特征，大多數(shù)腫瘤患者并非死于原發(fā)性癌而是死于轉(zhuǎn)移性癌。近年來，針對循環(huán)腫瘤細胞(circulating tumor cells,CTCs)外滲機制的研究已成為抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的新熱點。本課題采用懸浮培養(yǎng)的方法模擬CTCs在血液循環(huán)系統(tǒng)中的懸浮力學狀態(tài)，探討懸浮力學狀態(tài)對乳腺腫瘤細胞與內(nèi)皮細胞之間相互作用的影響，重點考察了細胞粘附分子(cell adhesion molecules,CAMs)整合素β1(inte

2、grinβ1)在該過程中所扮演的角色。主要研究工作和實驗結(jié)果如下：
　?、賾腋∨囵B(yǎng)促進乳腺腫瘤細胞的外滲
　　通過流動腔粘附實驗和Transwell細胞遷移實驗檢測貼壁組和懸浮組MDA-MB-231乳腺腫瘤細胞在內(nèi)皮細胞層的粘附能力、鋪展能力及跨內(nèi)皮遷移能力。流動腔粘附實驗結(jié)果表明：經(jīng)懸浮培養(yǎng)1天或3天的MDA-MB-231細胞，其在內(nèi)皮細胞層的粘附能力顯著強于貼壁組(P<0.05)，懸浮培養(yǎng)1天和3天之間無顯著性差異。利用

3、軟件ImageJ對乳腺腫瘤細胞的鋪展形態(tài)進行統(tǒng)計分析，結(jié)果表明：在相同共孵育時間下，懸浮組MDA-MB-231細胞在內(nèi)皮細胞層的鋪展面積顯著大于貼壁組(P<0.01)；共孵育6小時，懸浮組MDA-MB-231細胞圓度顯著小于貼壁組。Transwell細胞遷移實驗結(jié)果表明：懸浮組MDA-MB-231細胞發(fā)生跨內(nèi)皮遷移的細胞數(shù)量顯著多于貼壁組(P<0.01)。
　?、趹腋×W狀態(tài)誘導整合素β1高表達
　　通過qPCR和免疫印跡法

4、檢測貼壁組和懸浮組MDA-MB-231細胞整合素β1的表達水平。實驗結(jié)果表明懸浮培養(yǎng)使得整合素β1在基因水平的表達量提高了2.35±0.58倍(P<0.05)，在蛋白水平的表達量提高了2.17±0.40倍(P<0.01)。通過siRNA技術(shù)對整合素β1進行敲低處理，qPCR結(jié)果表明：貼壁組MDA-MB-231細胞的整合素β1在基因水平上降低了62％(貼壁對照組化1處理，P<0.01)，敲低效果極顯著；懸浮組MDA-MB-231細胞的整合

5、素β1在基因水平上降低了74%(P<0.01)，敲低效果極顯著。
　　免疫印跡法結(jié)果表明：整合素β1敲低處理后，貼壁組MDA-MB-231細胞的整合素β1在蛋達水平上降低了39%(貼壁對照組化1處理，P<0.01)，敲低效果極顯著；懸浮組MDA-MB-231細胞的整合素β1在蛋白水平上降低了80%(P<0.01)，敲低效果極顯著。
　　③整合素β1對乳腺腫瘤細胞外滲的影響
　　設置貼壁對照組(Ad-Ctrl)、貼壁整合

6、素β1敲低組(Ad-ITGB1)、懸浮對照組(Susp-Ctrl)、懸浮整合素β1敲低組(Susp-ITGB1)，通過流動腔粘附實驗、鋪展實驗和Transwell細胞遷移實驗檢測整合素β1對MDA-MB-231細胞外滲能力的影響。實驗結(jié)果表明：整合素β1敲低組MDA-MB-231細胞(si-ITGB1)與陰性對照組(si-Ctrl)相比，在內(nèi)皮細胞層的粘附數(shù)量顯著降低；si-ITGB1組和si-Ctrl組MDA-MB-231在內(nèi)皮細胞層