禁食對(duì)氯仿染毒大鼠代謝和肝毒性影響的研究.pdf

1、目的:本課題擬通過不同劑量下氯仿經(jīng)口給藥、腹腔注射以及吸入染毒,研究禁食對(duì)氯仿代謝和肝毒性影響,探討肝臟酶誘導(dǎo)的劑量依賴作用,為禁食對(duì)毒物在體內(nèi)的毒性及代謝改變的研究提供理論和實(shí)踐上的參考.方法:選用8周齡Wistar雄性大鼠,正常喂養(yǎng)至10周齡時(shí),隨機(jī)分為2組,每組65只,第一組(禁食組)整夜禁食,大鼠從實(shí)驗(yàn)前一天下午16:00時(shí)禁食至實(shí)驗(yàn)當(dāng)天上午10:00時(shí),期間僅喂水;第二組(喂養(yǎng)組)正常喂食.禁食對(duì)肝臟微粒體蛋白、CYP450含

2、量及體外氯仿代謝影響的測(cè)定:取禁食組和喂養(yǎng)組大鼠各5只,斷頭處死后切除肝臟,用磷酸緩沖溶液配置25％(w/v)肝組織勻漿,離心后測(cè)定GSH含量;其余部分進(jìn)一步離心,并與緩沖液再次緩沖后按照Lowry方法測(cè)定其蛋白成份保存?zhèn)溆?微粒體蛋白含量和CYP450酶含量按照Omura方法進(jìn)行分光光度測(cè)定.并用Sato和Nakajima平衡測(cè)定法,通過酶底物消失率的改變,定量體外氯仿代謝.氯仿給藥:取禁食組大鼠60只,隨機(jī)分為12個(gè)小組,1-4組分

3、別吸入0,50,100、500ppm氯仿氣體6小時(shí),5-8和9-12組分別經(jīng)口和腹腔注射給藥,給予0,100,200、400mg/kg氯仿,24小時(shí)后進(jìn)行指標(biāo)測(cè)定.喂養(yǎng)組60只大鼠同步操作,方法相同.給藥大鼠在實(shí)驗(yàn)當(dāng)天16:00時(shí)開始持續(xù)喂食、喂水.指標(biāo)測(cè)定:從鼠尾采血20 μl,用Sato et al氣相色譜方法,測(cè)定血液中氯仿濃度.生物化學(xué)測(cè)定:用Ellman方法測(cè)定經(jīng)氯仿染毒24小時(shí)后大鼠肝臟GSH含量,用速率法測(cè)定血清中GOT和