尿毒癥患者橈動脈鈣化與AKP、BGP、OPN表達的關系.pdf

1、背景：心血管疾病是慢性腎臟病患者致死的主要原因,,幾乎占ESRD病人總死亡人數的50％。大約20%歸因于冠狀動脈疾病。動脈鈣化尤其是冠狀動脈鈣化是心血管疾病風險因素之一,而深入研究表明,心血管疾病血管鈣化是關于ESRD患者全因死亡和心血管死亡的一個獨立預測因子。
　　 血管鈣化主要包括兩種類型,內膜鈣化和中膜鈣化,前者是一種彌漫性動脈粥樣硬化,后者呈局限性分布,和動脈粥樣硬化風險因素無關,常見于年輕血液透析患者。中膜鈣化發(fā)生在動

2、脈中層,主要累及內彈力膜,整條動脈受累,中膜鈣化是CKD患者血管鈣化的特點。
　　 血管中膜鈣化,引起血管中膜厚度增加,動脈僵硬,順應性降低,收縮壓升高,舒張壓降低,脈壓增大。脈波速度增快。動脈擴張受損,后負荷加重,左心室肥厚,影響冠狀動脈灌注。既往認為血管鈣化僅僅是鈣磷失衡所致的鈣鹽沉積于細胞和組織間的被動過程[4],近年來認為血管鈣化是類似于骨和軟骨形成的主動的調節(jié)過程。血管平滑肌細胞表達成骨細胞表型是血管鈣化過程的中心環(huán)節(jié)

3、[5]。CKD患者血管鈣化的調節(jié)機制比較復雜,目前尚未闡明。可能與成骨樣細胞產生的膠原和非膠原的基質蛋白有關,后者包括各種蛋白如骨橋蛋白、堿性磷酸酶、骨鈣素、骨形成蛋白(BMP2)及基質Gla蛋白質等[6,7]。
　　 目的：本研究共分為兩個部分,第一部分研究橈動脈內瘺術患者血管鈣化情況;第二部分研究不同程度血管鈣化患者堿性磷酸酶(AKP)、骨鈣素(BGP)、骨橋蛋白(OPN)的蛋白及基因的表達情況,并了解三種蛋白的表達情況與動

4、脈中膜鈣化的關系。
　　 材料與方法：
　　 1.標本來源
　　 血管標本取自2010年11月至2011年9月間在鄭州大學第一附屬醫(yī)院住院的尿毒癥患者進行動靜脈內瘺手術切除的橈動脈標本共47例。標本取得后分為兩份一份用過碘酸鹽-賴氨酸-多聚甲醛固定,另一部分保存至液氮中凍存?zhèn)銻NA提取使用。
　　 2.HE染色、茜素紅染色蘇木精-伊紅染色(HE染色),觀察血管結構,分析血管內膜、中膜、外膜的基本層次,以及

5、是否存在其他血管病變,鈣鹽顆粒呈深藍色。茜素紅染色,鈣化部分會呈現清晰的橘紅色,觀察血管鈣化程度,根據血管鈣化的嚴重程度分為三組,分別是無鈣化組、輕中度鈣化組、重度鈣化組。
　　 3.免疫組化檢測免疫組化檢測觀察AKP、BGP、OPN在鈣化區(qū)域的表達,并分析其蛋白表達在不同的鈣化程度血管中的分布。
　　 4.實時熒光定量PCR檢測利用組織RNA提取試劑盒提取組織的總RNA,反轉錄制備成cDNA后,采用熒光定量PCR的方法

6、檢測堿性磷酸酶(AKP)、骨鈣素(BGP)、骨橋蛋白(OPN)在不同程度鈣化血管組織中的表達水平;
　　 結果：
　　 1.鈣化程度較高標本比無鈣化標本血管中膜明顯增厚,呈現出密集彌漫性鈣沉積點。根據定性資料的spearman相關分析,血管鈣化的程度與患者的年齡、透析時間、鈣磷乘積及全段甲狀旁腺激素水平成正相關(r均＞0,P＜0.05),有糖尿病的患者血管鈣化的程度較無糖尿病的患者高(r=0.484,P＜0.01),有頸

7、動脈斑塊的患者血管鈣化程度較無頸動脈斑塊的患者高(r=0.605,P＜0.01)。性別、有無高血壓病史、血鈣、血磷水平與血管鈣化程度無明顯相關性(P＞0.05)。
　　 2.免疫組化檢測觀察到AKP、BGP、OPN在鈣化區(qū)域即動脈中膜中的蛋白表達水平。血管無鈣化組、血管輕中度鈣化組以及血管重度鈣化組之間兩兩比較蛋白表達水平差異均有統(tǒng)計學意義(P均＜0.05),并且血管重度鈣化組的蛋白表達水平比血管輕中度鈣化組的蛋白表達水平高,血

8、管輕中度鈣化組的蛋白表達水平比血管無鈣化組的蛋白表達水平高。
　　 3.實時熒光定量PCR(Real-time PCR)的方法檢測了標本中AKP、BGP、OPN的mRNA表達水平。血管無鈣化組、血管輕中度鈣化組以及血管高度鈣化組之間兩兩比較mRNA表達水平差異均有統(tǒng)計學意義(P均＜0.05),并且血管重度鈣化組的mRNA表達水平比血管輕中度鈣化組的mRNA表達水平高,血管輕中度鈣化組的mRNA表達水平比血管無鈣化組的mRNA表達