2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、第一部分尿毒癥患者橈動脈鈣化與α-SMA及OP表達關(guān)系的研究 目的:觀察尿毒癥患者橈動脈鈣化的組織學(xué)特點及平滑肌肌動蛋白-α(α-SMA)和骨橋蛋白(OP)的表達變化,并探討影響血管改變的相關(guān)因素。 方法:30例尿毒癥患者,于動靜脈內(nèi)瘺術(shù)中取小段橈動脈。用VonKossa染色觀察動脈鈣化的情況,免疫組化研究中層平滑肌肌動蛋白-α(α-SMA)和骨橋蛋白(OP)的表達,并和正常對照組進行比較。 結(jié)果:正常橈動脈無鈣

2、化,平滑肌細(xì)胞排列整齊,免疫組化顯示α-SMA表達豐富,幾乎無OP的表達。在30例尿毒癥患者中,11例(36.67﹪)出現(xiàn)橈動脈鈣化,主要局限于平滑肌層,其中6例(20﹪)輕、中度鈣化,5例(16.66﹪)重度鈣化,19例(63.33﹪)未見明顯鈣化。血管鈣化與血鈣、磷及鈣磷乘積水平密切相關(guān)(P<0.05),與患者年齡及2型糖尿病史有關(guān)(P<0.05),與血肌酐(Cr)、甲狀旁腺激素(PTH)的水平無明顯相關(guān)性(P>0.05)。在11例

3、鈣化的血管,平滑肌細(xì)胞排列紊亂,α-SMA表達減弱甚至缺失,伴OP表達量增加,且α-SMA、OP的變化與血管鈣化的嚴(yán)重程度有關(guān)(P<0.05)。在組織學(xué)尚無明顯鈣化的19例血管中,有9例可見部分區(qū)域α-SMA水平的降低和OP的沉積。 結(jié)論:尿毒癥患者橈動脈鈣化主要發(fā)生在血管中膜,鈣化的嚴(yán)重程度與血磷及鈣磷乘積水平、2型糖尿病史有關(guān)。平滑肌細(xì)胞的標(biāo)志蛋白α-SMA表達減少、骨基質(zhì)蛋白OP分泌增多與血管鈣化的關(guān)系密切,說明尿毒癥特殊

4、的內(nèi)環(huán)境使平滑肌細(xì)胞失去了原有的生物學(xué)特點,具有類似成骨樣細(xì)胞的功能。 第二部分高磷誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的人血管平滑肌細(xì)胞向類似成骨樣細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的分子機制探討 目的:探討體外高磷培養(yǎng)的條件下,人血管平滑肌細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的特點和分子機制;分析轉(zhuǎn)化生長因子β1(Transforminggrowthfactor-β1,TGF-β1)在這一病理過程中的地位和作用。 方法:(1)用組織塊貼壁的方法建立人主動脈血管平滑肌細(xì)胞的體外培養(yǎng)技

5、術(shù); (2)用WesternBlot的方法,分別觀察在不同磷濃度(1.0mM,2.5mM,3.5mM)以及TGF-β1(1ng/ml、2ng/ml)刺激的條件下,人血管平滑肌細(xì)胞在不同的培養(yǎng)時間后,細(xì)胞自身標(biāo)志蛋白α-SMA以及成骨細(xì)胞相關(guān)蛋白(Ⅰ型膠原、骨橋蛋白和骨鈣素等)表達的動態(tài)變化過程; (3)通過免疫熒光觀察上述指標(biāo)以及成骨細(xì)胞特異性的核轉(zhuǎn)錄因子Cbfα1的表達變化特點; (4)以硝酸銀(VonKoss

6、a)染色和茜素紅染色了解高磷條件下細(xì)胞鈣鹽沉積的狀況; (5)電鏡觀察高磷培養(yǎng)的條件下,鈣化的血管平滑肌細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)特點; (6)用WesternBlot和免疫熒光的方法,分析高磷條件下,人血管平滑肌細(xì)胞中TGF-β1的蛋白表達變化;通過ELISA檢測細(xì)胞上清液中活性TGF-β1的水平; (7)通過RT-PCR觀察高磷對血管平滑肌細(xì)胞TGF-β1的mRNA表達影響; (8)用WesternBlot和免疫

7、熒光的方法,分析在高磷的刺激下,細(xì)胞中TGF-β1的Ⅰ型受體(TβRI)的表達變化; (9)通過中和抗體阻斷細(xì)胞內(nèi)TGF-β1的作用,以TβRI、Cbfα1、FN和Ⅰ型膠原為觀察指標(biāo),分析高磷對人血管平滑肌細(xì)胞生物學(xué)效應(yīng)的變化。 結(jié)果:(1)在無血清培養(yǎng)的條件下,高磷(2.5mM)和TGF-β1(1ng/ml)分別刺激人血管平滑肌細(xì)胞12小時后,胞內(nèi)Cbfα1的表達就明顯上升,且迅速從胞漿轉(zhuǎn)移到胞核,提示VSMC開始具有

8、類似成骨樣細(xì)胞的生物學(xué)特性; (2)高磷組和TGF-β1組的細(xì)胞在無血清培養(yǎng)3天后,Ⅰ型膠原、纖維連接蛋白和骨橋蛋白的表達均明顯上調(diào);在含15﹪胎牛血清的營養(yǎng)液中培養(yǎng)的第6天,兩組細(xì)胞中骨鈣素的產(chǎn)量開始增加;第12天,用TGF-β1刺激的細(xì)胞中α-SMA的表達下降,而高磷組產(chǎn)生類似現(xiàn)象需要15天; (3)在2.5mM的高磷環(huán)境下培養(yǎng)15天后,硝酸銀染色和茜素紅染色顯示,細(xì)胞出現(xiàn)多處斑片狀的鈣鹽沉積;電鏡可見胞漿內(nèi)產(chǎn)生大量

9、膠原纖維和鈣化的基質(zhì)囊泡; (4)在正常無血清的培養(yǎng)條件下,人血管平滑肌細(xì)胞的上清液中幾乎不含活性TGF-β1,當(dāng)用2.5mM的高磷刺激6小時后,上清液中TGF-β1的水平增至0.28ng/ml,在隨后觀察的24、48小時中,TGF-β1的濃度基本保持不變; (5)當(dāng)細(xì)胞在含15﹪胎牛血清的營養(yǎng)液中培養(yǎng)3天時,正常對照組的上清液中TGF-β1的基礎(chǔ)濃度為0.16ng/ml,而高磷組TGF-β1的含量明顯增加(2.5mM時

10、為0.35ng/ml,3.5mM時為0.39ng/ml,與正常對照組相比,P<0.05); (6)WesternBlot和免疫熒光的結(jié)果表明,在無血清培養(yǎng)的條件下,人血管平滑肌細(xì)胞中僅含極微量TGF-β1,當(dāng)高磷刺激3天后,胞漿中TGF-β1的水平明顯升高; (7)RT-PCR分析顯示,當(dāng)2.5mM的高磷刺激1小時后,體外無血清培養(yǎng)的細(xì)胞中TGF-β1的mRNA水平明顯上升,6小時后基本達到高峰,并一直持續(xù)至所觀察的48

11、小時; (8)Western和免疫熒光的結(jié)果顯示,正常無血清培養(yǎng)的條件下,血管平滑肌細(xì)胞僅表達少量TβRI,當(dāng)2.5mM的高磷刺激3小時后,細(xì)胞中TβRI的含量開始增加,6小時后達到高峰; (9)TGF-β1的中和抗體可明顯抑制高磷誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞的生物學(xué)變化,如TβRI的表達上調(diào)、Cbfα1的產(chǎn)生增加和核轉(zhuǎn)移等,并具有抑制細(xì)胞產(chǎn)生FN和Ⅰ型膠原的作用。 結(jié)論:(1)高磷能使體外培養(yǎng)的人血管平滑肌細(xì)胞表達成骨

12、細(xì)胞的掌控基因,啟動特異性骨相關(guān)蛋白的產(chǎn)生,最終導(dǎo)致細(xì)胞自身標(biāo)志性抗原的丟失和細(xì)胞外鈣鹽的沉積; (2)TGF-β1對人血管平滑肌細(xì)胞的作用與高磷十分相似,能誘導(dǎo)其向類似成骨樣細(xì)胞轉(zhuǎn)分化; (3)高磷能刺激體外培養(yǎng)的人血管平滑肌細(xì)胞迅速產(chǎn)生TGF-β1,并上調(diào)其Ⅰ型受體(TβRI)的表達,表明TGF-β1可能在高磷作用途徑的下游; (4)TGF-β1的中和抗體能明顯拮抗高磷對血管平滑肌細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng),提示TGF

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