鈣離子在P物質(zhì)促胃癌細(xì)胞增殖過程中作用的研究.pdf

1、【背景】感覺神經(jīng)肽P物質(zhì)(substance P，SP)是主要的速激肽之一，廣泛分布于包括神經(jīng)系統(tǒng)在內(nèi)的各組織中，SP除具有神經(jīng)遞質(zhì)和炎性介質(zhì)的作用外，對多種細(xì)胞還具有促有絲分裂活性。近年來大量的實驗研究證明SP對多種細(xì)胞有促有絲分裂活性，促進(jìn)細(xì)胞的增殖，其中包括平滑肌細(xì)胞、上皮細(xì)胞以及一些神經(jīng)源性的腫瘤細(xì)胞等。前期實驗發(fā)現(xiàn)人的胃癌組織內(nèi)分布著較正常胃組織更多的P物質(zhì)免疫陽性神經(jīng)纖維。它們的分布特征表明其是由于胃癌組織的存在而誘發(fā)再生的

2、神經(jīng)纖維。該結(jié)果表明胃癌組織內(nèi)分布的肽能神經(jīng)纖維可能直接促進(jìn)胃癌細(xì)胞增殖。SP是通過與速激肽的受體（NK）結(jié)合后發(fā)揮其生理作用的。SP與NK-1 受體結(jié)合可激活引起細(xì)胞肌醇磷脂的水解，細(xì)胞內(nèi)Ca2+升高，cAMP水平增高以及絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）的活化，從而啟動細(xì)胞內(nèi)一系列信號事件，激動相應(yīng)的第二信使來啟動多個代謝途徑。最終導(dǎo)致細(xì)胞的增殖。 【目的】研究胃癌細(xì)胞系MKN45 表面NK-1 受體的表達(dá)，SP 及拮抗劑（NK

3、-1 受體拮抗劑、尼卡地平和新霉素）對體外培養(yǎng)的人胃癌細(xì)胞的增殖的調(diào)節(jié)作用，探討鈣信號在其中的作用。 【方法】以第四代人胃癌細(xì)胞系MKN45 為研究對象，以不同濃度的SP 刺激，觀察其對細(xì)胞增殖的影響，又分別以ASN-1377642（NK-1 受體拮抗劑）、新霉素（PIP2 拮抗劑）和尼卡地平(鈣通道阻斷劑）為干預(yù)因素，觀察它們對P 物質(zhì)作用的影響，并用激光共聚焦掃描顯微鏡觀察在該過程中鈣離子濃度的變化。 【結(jié)果】SP在

4、10nmol/L～100nmol/L范圍內(nèi)對人胃癌細(xì)胞呈劑量依賴性增生刺激。ASN-1377642(NK-1 受體拮抗劑)、新霉素(10-6mol/L)和尼卡地平(10-6mol/L)均可以明顯的抑制SP的促增殖作用，增加劑量抑制率不再增加。 在Hanks液中，SP可以顯著升高細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度，ASN-1377642 和尼卡地平可以顯著的抑制這一效應(yīng)，在D-Hanks液中，SP同樣可以增加細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度，但是幅度較在H

5、anks液中有顯著性降低。 【結(jié)論】 1、胃癌細(xì)胞系MKN45表達(dá)速激肽受體NK-1。 2、SP通過與受體NK-1結(jié)合對胃癌細(xì)胞系MKN45 有促增殖作用。 3、SP與受體NK-1結(jié)合后引起細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度的升高。 4、SP導(dǎo)致的細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度的升高主要通過細(xì)胞外鈣離子內(nèi)流和鈣庫鈣離子釋放。 5、MKN45游離鈣離子濃度的升高在SP促增值效應(yīng)中起了重要的作用。 6、鈣離子