椎間盤炎動物模型的建立及自免疫狀態(tài)的研究.pdf

1、目的：通過手術(shù)破壞纖維環(huán)和軟骨終板建立椎間盤炎的動物模型，探討其影像學表現(xiàn)及自免疫狀態(tài)表達的變化過程，探討自免疫反應(yīng)在椎間盤炎中的作用機制，為臨床診斷和治療提供理論基礎(chǔ)。 方法：選擇健康成年新西蘭大耳白兔50只，雌雄不限，隨機分為三組：手術(shù)組(30只)，經(jīng)前外側(cè)入路手術(shù)破壞腰椎間盤纖維環(huán)及軟骨終板，建立兔椎間盤炎動物模型；設(shè)立假手術(shù)組(10只)及對照組(10只)。對照組即刻行X線及MRI檢查，處死取腰3/4、腰4/5、腰5/6椎

2、間盤標本。假手術(shù)組同手術(shù)組取相同手術(shù)入路，暴露椎間盤但不破壞纖維環(huán)和軟骨終板。手術(shù)組與假手術(shù)組分別于術(shù)后1周、2周、4周、8周、12周分批處死動物，處死取材前行X線片、MRI檢查。取手術(shù)區(qū)椎間盤標本，行：(1)常規(guī)HE染色，形態(tài)學比較及淋巴細胞的表達；(2)Masson染色，觀察肌組織炎癥纖維化表現(xiàn)；(3)應(yīng)用免疫組化技術(shù)和免疫熒光技術(shù)觀察標本CD4陽性、CD8陽性T淋巴細胞，免疫球蛋白IgG、IgM的表達。手術(shù)組與假手術(shù)組、對照組進行

3、比較以分析各指標的表達及變化過程，探討自免疫反應(yīng)在椎間盤炎中的作用；(4)細菌學培養(yǎng)。 結(jié)果： 1.影像學表現(xiàn)：手術(shù)組常規(guī)X線檢查在術(shù)后1-2周未見異常征象，術(shù)后4周顯示手術(shù)區(qū)椎間隙狹窄，術(shù)后12周可見椎體骨質(zhì)破壞和硬化。術(shù)后4周MRI矢狀位T2WI上即可見手術(shù)椎間盤信號異常，呈不同程度的破壞、碎裂、變小，正常髓核的高信號消失，呈低信號改變。終板及終板下椎體松質(zhì)骨有不同程度的侵犯破壞致椎體和椎間盤分界模糊不清，相鄰椎體受

4、累，T2WI上呈混雜斑點狀高信號。術(shù)后12廚T2WI上可見手術(shù)椎間盤相鄰椎體高信號，發(fā)生病理性骨折。假手術(shù)組與對照組均未見異常。 2.HE染色：光鏡下可見手術(shù)組椎間盤內(nèi)、外層纖維環(huán)紊亂，失去正常結(jié)構(gòu)，膠原纖維不連續(xù)、增生，外層纖維環(huán)成纖維細胞增多，術(shù)后1-4周可見淋巴細胞浸潤，近纖維環(huán)內(nèi)層髓核部分有大量軟骨細胞增生。假手術(shù)組及對照組則無上述表現(xiàn)。 3.Masson染色：光鏡下可見手術(shù)組椎間盤外層纖維環(huán)呈綠色，其邊緣肌組織

5、呈紅色，兩者交界的灰色區(qū)域為肌組織因炎癥反應(yīng)而正纖維化。其間散在淋巴細胞。 4.免疫組化染色：手術(shù)組1周、2周、4周的標本可見近邊緣細胞浸潤區(qū)有CD4陽性、CD8陽性淋巴細胞分布，其中CD4陽性淋巴細胞主要在術(shù)后1周、2周取材的標本表達較多，CD8陽性淋巴細胞則在術(shù)后2周、4周取材的標本表達較多。而假手術(shù)組則于術(shù)后1周、2周可見有極少量淋巴細胞表達，對照組未見淋巴細胞表達。手術(shù)組淋巴細胞表達與假手術(shù)組、對照組比較具有統(tǒng)計學意義。

6、 5.免疫熒光：手術(shù)組可見手術(shù)椎間盤近邊緣區(qū)免疫球蛋白IgG、IgM呈陽性反應(yīng)，于1周少量表達，術(shù)后2周、4周、8周大量表達。假手術(shù)組及對照組均可見IgG極少量表達，未見IgM表達。手術(shù)組與假手術(shù)組、對照組比較具有統(tǒng)計學意義。 6．細菌培養(yǎng)陰性。 結(jié)論： 1．運用前外側(cè)入路手術(shù)破壞纖維環(huán)及軟骨終板可以建立椎間盤炎動物模型，其影像學表現(xiàn)符合臨床文獻對椎間盤炎的報道； 2．纖維環(huán)及軟骨終板受破壞后，髓