炎癥因子Daintain-AIF-1在動脈粥樣硬化中的功能研究.pdf

1、上世紀(jì)90年代以前，認(rèn)為血漿中膽固醇和低密度脂蛋白濃度過高，是動脈粥樣硬化的主要危險因素；認(rèn)為動脈粥樣硬化是一種非炎性病變。近20年來的研究發(fā)現(xiàn)，盡管生活方式改變和新藥物的采用，可降低血漿膽固醇和低密度脂蛋白濃度，但心腦血管疾病仍然是美國、歐洲和亞洲部分地區(qū)造成死亡的主要疾病。近10年分子免疫學(xué)研究表明，動脈粥樣硬化斑塊處集中反映了一系列在細(xì)胞和分子水平上的炎癥應(yīng)答，動脈粥樣硬化被鑒定為是一種炎癥性疾病。1994年，陳正望等人以豬小腸為

2、原料，從中純化并鑒定出一個多肽，命名為daintain。1996年，Utans等從大鼠心臟移植排斥反應(yīng)所形成的動脈粥樣硬化斑塊組織中克隆出一個巨噬細(xì)胞因子allograft inflammatory factor-1 (AIF-1)，由于二者的一級結(jié)構(gòu)高度同源，故并稱Daintain/AIF-1。作為一個由巨噬細(xì)胞分泌，與炎癥、免疫相關(guān)的炎癥因子，對Daintain/AIF-1在炎癥、血管病變、腫瘤以及自身免疫性疾病等方面的影響有著越來

3、越多的研究。本實驗室前期研究表明，Daintain/AIF-1 能夠促進(jìn)腫瘤增生、改變細(xì)胞周期、促進(jìn)細(xì)胞增殖以及加劇1 型糖尿病，由于這些都與炎癥和免疫方面密切相關(guān)。此外，我們還發(fā)現(xiàn)Daintain/AIF-1在動脈粥樣硬化組織中表達(dá)陽性，而在周圍正常組織和正常人動脈血管組織中為弱陽性或陰性。這提示Daintain/AIF-1與動脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展過程密切相關(guān)。然而，目前Daintain/AIF-1 影響動脈粥樣硬化進(jìn)程的機(jī)理并不清

4、楚。研究發(fā)現(xiàn)Daintain/AIF-1 可以促進(jìn)巨噬細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞和動脈內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移以及增強(qiáng)T 淋巴細(xì)胞的分泌活動，表明它在巨噬細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞和動脈內(nèi)皮細(xì)胞等動脈粥樣硬化組織中存在的細(xì)胞激活過程中發(fā)揮重要的作用?，F(xiàn)在已經(jīng)清楚，巨噬細(xì)胞向泡沫細(xì)胞的轉(zhuǎn)化、動脈內(nèi)皮損傷以及血管平滑肌增生在動脈粥樣硬化的起始、發(fā)展直到斑塊破裂過程中扮演重要角色。由此可預(yù)見，Daintain/AIF-1 可能通過激活巨噬細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞

5、和動脈內(nèi)皮細(xì)胞來作用于動脈粥樣硬化的進(jìn)程。
　　 本研究主要內(nèi)容包括：⑴通過免疫組織化學(xué)染色的方法，檢測發(fā)現(xiàn)在動脈粥樣硬化斑塊處有大量的Daintain/AIF-1 陽性區(qū)，而其周圍的非病變區(qū)域中幾乎不能檢測到Daintain/AIF-1。⑵為進(jìn)一步研究Daintain/AIF-1和動脈粥樣硬化之間的關(guān)系，我們檢測了病人血清中Daintain/AIF-1的含量。我們采用具有潛在動脈粥樣硬化傾向的高血壓病人血清來檢測Daintai

6、n/AIF-1的含量，并發(fā)現(xiàn)與正常人相比，該類病人血清中其Daintain/AIF-1的含量較高，且與LDL-C的含量成正比關(guān)系，為Daintain/AIF-1 研發(fā)成為一種新的動脈粥樣硬化檢測指標(biāo)奠定了一定的基礎(chǔ)。⑶為了更經(jīng)濟(jì)、方便地獲得Daintain/AIF-1 蛋白，我們采用基因工程方式，表達(dá)出了高純度的Daintain/AIF-1。并基于其已經(jīng)報道的部分活性做了檢測，證明重組蛋白具有生物學(xué)功能活性。⑷尋找Daintain/AI

7、F-1在小鼠胰腺和血管組織中的相互作用蛋白。此前，本實驗室發(fā)現(xiàn)在體外Daintain/AIF-1 能夠與胱硫醚β合成酶相結(jié)合，通過原核表達(dá)的方法來獲得胱硫醚β合成酶，用以研究Daintain/AIF-1 對其酶活的影響；通過將重組的Daintain/AIF-1 偶聯(lián)在NTA-Ni 介質(zhì)上，與動脈血管組織裂解液結(jié)合洗脫后，發(fā)現(xiàn)一個新的結(jié)合蛋白——血紅蛋白β1 亞基，后續(xù)研究發(fā)現(xiàn)Daintain/AIF-1 能夠促使紅細(xì)胞溶解和血紅素的釋放

8、。⑸在體內(nèi)，我們通過給小鼠尾靜脈注射Daintain/AIF-1，研究其對小鼠體內(nèi)與動脈粥樣硬化相關(guān)的多項生化指標(biāo)的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)Daintain/AIF-1 能使小鼠血清中的C 反應(yīng)蛋白、同型半胱氨酸、血糖濃度上升，降低超氧化物歧化酶的活性。⑹在體外，我們通過在培養(yǎng)基中添加Daintain/AIF-1的方式，探究Daintain/AIF-1對U937和HUVEC的功能特征的影響。結(jié)果顯示，添加Daintain/AIF-1的實驗組的增殖

9、速率明顯快于對照組。此外，我們還發(fā)現(xiàn)Daintain/AIF-1 能夠促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞中的C-反應(yīng)蛋白和一氧化氮合酶的基因表達(dá)。佛波醇-12-肉豆蔻酯-13-乙酯（PMA）趨化的U937 巨噬細(xì)胞與ox-LDL 共培養(yǎng)實驗中發(fā)現(xiàn)，Daintain/AIF-1 能夠通過提高巨噬細(xì)胞表面的清道夫受體的表達(dá)，而增強(qiáng)巨噬細(xì)胞吞噬ox-LDL 能力，從而促進(jìn)巨噬細(xì)胞向泡沫細(xì)胞轉(zhuǎn)化。綜上所述，Daintain/AIF-1在動脈粥樣硬化形成和中后期的發(fā)展