32P-磷酸鉻-聚L乳酸粒子植入肝癌(H22)移植瘤模型體內(nèi)分布與治療淋巴道轉(zhuǎn)移潛能的研究及其對免疫功能的影響.pdf

1、目的：探討32P-磷酸鉻-聚L乳酸(32P-CP-PLLA)粒子植入肝癌(H22)移植瘤模型體內(nèi)分布及對區(qū)域淋巴結(jié)(LN)治療的潛能和間質(zhì)植入SD大鼠對其免疫功能的影響。
　　 方法：荷H22腹水型肝癌小鼠(北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥物研究所)腹水0.2ml接種于KM小鼠(昆明種)(東南大學(xué)醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供)腹腔內(nèi)傳代，連續(xù)傳代5次后抽取接種后7天小鼠腹水，計數(shù)腹水含瘤細(xì)胞數(shù)，生理鹽水適當(dāng)稀釋腹水，使細(xì)胞濃度達(dá)到4～6×108細(xì)胞/

2、ml，取稀釋后腹水0.05ml(含2～3×107個活瘤細(xì)胞)注射于KM小鼠右后肢爪墊內(nèi)側(cè)皮下，建立小鼠淋巴轉(zhuǎn)移模型。
　　 實驗一、建立KM小鼠爪墊腹水型肝癌細(xì)胞(H22)移植瘤淋巴轉(zhuǎn)移模型50只，隨機分為2組(n=25)，瘤體內(nèi)分別植入1枚32P-CP-PLLA和注入膠體32P-磷酸鉻(32P-CP)，37MBq/只。給藥后1d、3d、7d、10d、14d每組各處死5只，觀察荷瘤鼠體內(nèi)生物分布，淋巴結(jié)病理學(xué)檢查。植入粒子的荷瘤

3、小鼠動態(tài)7.0T Micro MR和γ相機韌致輻射顯像。
　　 實驗二、KM小鼠55只，右爪墊下注射H22腹水型肝癌細(xì)胞建立爪墊移植瘤淋巴道轉(zhuǎn)移模型，隨機分11組(n=5)。移植瘤體分別植入32P-CP-PLLA粒子或注射膠體32P-磷酸鉻(32P-CP)，劑量依序為18.5MBq、37MBq和74MBq；另劑量為37MBq/只，植瘤后于3d、7d、10d、13d不同時間植入32P-CP-PLLA粒子。給藥后動態(tài)γ顯像，14d處

4、死，解剖KM小鼠，剝離引流區(qū)右胭窩淋巴結(jié)(PLN)和腹股溝淋巴結(jié)(ILN)，電子天平稱取質(zhì)量，對瘤體和LN進(jìn)行光鏡、電鏡檢測，觀察量效關(guān)系和治療時間不同的時效關(guān)系。計量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。
　　 實驗三、SD大鼠20只，分為4組(n=5)：肝臟粒子組、肌肉粒子組、肝臟32P-CP組和正常對照組，給藥活度74MBq/只，γ相機韌致輻射顯像，流式細(xì)胞儀動態(tài)檢測血清CD3、CD4、C

5、D8表達(dá)水平。計量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。
　　 結(jié)果：
　　 實驗一、體內(nèi)生物分布示植入32P-CP-PLLA粒子在瘤體內(nèi)未發(fā)生移位，瘤體、右胭窩淋巴結(jié)(PLN)和右腹股溝淋巴結(jié)(ILN)單位質(zhì)量放射性活度依序為17.9±8.3MBq/g、5.8±3.24MBq/g和4.1±3.9MBq/g，其余主要臟器活度范圍0.0056～0.3867MBq/g。32P-CP組瘤體、右

6、PLN和右ILN依序為14.6±5.9MBq/g、16.5±4.0MBq/g和6.1±2.7MBq/g，其余主要臟器活度范圍0.0547～0.9501MBq/g。MR掃描示粒子為一橢圓形低信號區(qū)。γ相機韌致輻射顯像示植入粒子組放射性分布持續(xù)局限濃聚于植入點，32P-CP組肝內(nèi)呈現(xiàn)放射性不均勻彌散分布，影漸淡。
　　 實驗二、γ顯像證實移植瘤體32P-CP-PLLA粒子組較膠體32P-CP組局限濃聚且持久，放射性粒子無移位或脫落。

7、區(qū)域LN聚集的放射性隨給藥劑量增加而增大，質(zhì)量則反之；同劑量LN活度膠體組明顯高于粒子組。粒子組PLN質(zhì)量依序為3.07±0.28、2.01±0.43和1.85±1.13(g×10-2)(F=4.24，P<0.05)；膠體組依序為2.56±0.26、2.17±0.25和1.33±0.25(g×10-2)(F=29.471，P<0.01)；與對照組4.98±1.82(g×10-2)比較P<0.05。同等劑量下，PLN的質(zhì)量膠體組與粒子組差

8、異不明顯(t=0.722，0.684，0.987，P>0.05)；ILN的質(zhì)量膠體組小于粒子組(t=3.14，2.62，6.18，P<0.05)。不同時間植入粒子，PLN質(zhì)量依序為1.53±0.61、2.82±0.29、3.92±0.46和4.31±0.56(g×10-2)(F=31.268，P<0.01)。形態(tài)學(xué)表現(xiàn)LN呈不同程度網(wǎng)格狀多灶性壞死，其間可見殘留癌細(xì)胞或其殘骸，同等劑量下膠體組較粒子組為著。
　　 實驗三、SD大

9、鼠肝臟粒子組免疫力3d開始降低，7d最低，14d恢復(fù)正常，與正常組比較CD37d(t=3.431，P=0.009)，CD4/CD83d、7d=0.83±0.38、0.43±0.08(t=2.91、8.08，P=0.022、0.000)，其余采血時間與正常對照組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。肌肉粒子組大鼠免疫力14d略降低，CD4/CD814d=0.82±0.32(t=3.28，P=0.012)其余時間正常。肝臟32P-CP組免疫

10、力3d時降低，7d降到最低，持續(xù)30d恢復(fù)正常，CD37d、14d、21d(t=4.48、3.71、2.91，P=0.002、0.006、0.024)，CD4/CD83d、7d、14d、21d=0.70±0.30、0.35±0.13、0.68±0.31、0.79±0.21(t=4.08、8.16、4.12、3.21，P=0.004、0.000、0.003、0.013)，其余各采血時間與正常對照組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。