白芷的質(zhì)量控制與體內(nèi)外代謝研究.pdf

1、白芷為傘形科植物白芷Angelica dahurica(Fisch． ex Hoffm.) Benth． etHook.f.或杭白芷Angelica dahurica(Fisch．ex Hoffm.) Benth． et Hook.f.var． formosana(Boiss．)Shan et Yuan的干燥根。主治感冒頭痛，眉棱骨痛，鼻塞，鼻淵，牙痛白帶，瘡瘍腫痛等癥，已有2000多年的歷史。香豆素類化合物作為白芷中的主要有效成分，主

2、要有抗組胺、促進(jìn)脂肪代謝、解痙、抗菌、抗癌、興奮運動和呼吸中樞、抑制花生四烯酸誘導(dǎo)的血小板聚集等作用。本研究主要應(yīng)用毛細(xì)管電泳法對白芷中的多種香豆素類成分同時進(jìn)行定量分析，對白芷進(jìn)行全面的質(zhì)量控制。
　　 藥物代謝是機體對藥物進(jìn)行化學(xué)處置的一個不可缺少的重要環(huán)節(jié)。研究藥物代謝有助于明確藥物的作用機制、副作用以及毒性，對合理制定藥物的給藥劑量、給藥方式等提供依據(jù)。本文對白芷中有效成分蛇床夫內(nèi)酯的體內(nèi)外代謝和排泄進(jìn)行研究，為進(jìn)一步研

3、究白芷的代謝途徑和排泄動力學(xué)奠定基礎(chǔ)。
　　 第一部分、毛細(xì)管電泳法同時測定白芷中8種香豆素類有效成分
　　 目的：建立用毛細(xì)管電泳同時測定白芷中香豆素類有效成分東莨菪內(nèi)酯、花椒毒酚、花椒毒素、佛手柑內(nèi)酯、氧化前胡素、歐前胡素、蛇床夫內(nèi)酯和異歐前胡素的方法。
　　 方法：以石英毛細(xì)管柱(75μm×60cm，有效長度30cm)作為分離通道，以10mmol/L硼砂-40mmol/L十二烷基硫酸鈉-20％乙腈作為電泳緩

4、沖液，工作電壓22kV，溫度20℃，檢測波長214nm。
　　 結(jié)果：8種成分在20min內(nèi)實現(xiàn)良好分離，各成分分別在1.25～20.04、1.78～28.53、0.44～7.01、0.67～10.74、7.62～121.86、3.94～63.08、2.89～46.21、3.02～48.35ng/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，且r≥0.9971，各成分的回收率為92.7％～105.6％，結(jié)果符合含量測定的要求。
　　 結(jié)論：該

5、方法同時測定了白芷中8種香豆素類有效成分，方法簡便、快速、分離度好，準(zhǔn)確度高，為科學(xué)評價與有效控制白芷藥材質(zhì)量提供新方法。
　　 第二部分、白芷有效成分蛇床夫內(nèi)酯的體外代謝研究
　　 目的：通過微生物轉(zhuǎn)化法和腸內(nèi)菌法研究蛇床夫內(nèi)酯的體外代謝，發(fā)現(xiàn)代謝產(chǎn)物，并通過放大實驗制備代謝產(chǎn)物單體。
　　 方法：1．微生物轉(zhuǎn)化法：通過比較了20種加藥菌液樣品和菌液空白、藥物空白的HPLC-PDA圖譜，尋找代謝產(chǎn)物，篩選出轉(zhuǎn)化

6、能力最強的菌種對微生物轉(zhuǎn)化實驗進(jìn)行放大，得到代謝產(chǎn)物單體，通過1H-NMR和MS方法鑒定其代謝產(chǎn)物，確定結(jié)構(gòu)。2．腸內(nèi)菌法：將大鼠新鮮糞便和蛇床夫內(nèi)酯于體外厭氧溫孵培養(yǎng)，對蛇床夫內(nèi)酯進(jìn)行體外代謝研究，尋找代謝產(chǎn)物。
　　 結(jié)果：1．微生物轉(zhuǎn)化法：發(fā)現(xiàn)4個代謝產(chǎn)物，經(jīng)過篩選，用菌株AS3.970對蛇床夫內(nèi)酯進(jìn)行轉(zhuǎn)化放大實驗，得到其中兩個代謝產(chǎn)物單體，通過1H-NMR和MS法對其進(jìn)行結(jié)構(gòu)確證，經(jīng)鑒定，代謝產(chǎn)物分別為3"，8-甲氧基異

7、歐前胡內(nèi)酯和5"-羥基-8-甲氧基異歐前胡內(nèi)酯。2．腸內(nèi)菌法：在腸內(nèi)菌藥品溶液中未發(fā)現(xiàn)蛇床夫內(nèi)酯的代謝產(chǎn)物。
　　 結(jié)論：微生物轉(zhuǎn)化和腸內(nèi)菌法可用來研究香豆素類化合物的體外代謝，為進(jìn)一步研究白芷的代謝途徑提供依據(jù)。
　　 第三部分、液質(zhì)聯(lián)用法同時測定大鼠血漿中蛇床夫內(nèi)酯及其代謝產(chǎn)物
　　 目的：建立一種用LC-MS法測定大鼠口服灌胃蛇床夫內(nèi)酯后血漿中蛇床夫內(nèi)酯及其代謝產(chǎn)物的方法。
　　 方法：收集灌胃給予

8、大鼠蛇床夫內(nèi)酯后的血漿樣品，用甲醇沉淀蛋白后進(jìn)行樣品分析，以0.5‰的甲酸甲醇-0.5‰的甲酸水作為流動相梯度洗脫，茴芹內(nèi)酯作為內(nèi)標(biāo)，正離子模式下檢測。
　　 結(jié)果：蛇床夫內(nèi)酯及其兩個代謝產(chǎn)物能在8min內(nèi)完全分離，在25～3200、3.91～500ng/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r≥0.9975)，高、中、低三個濃度質(zhì)控樣品的回收率在97.4％～103.2％，樣品穩(wěn)定性良好，所有結(jié)果符合生物樣品測定要求。
　　 結(jié)論：該

9、方法準(zhǔn)確，快速，靈敏，可以同時測定血漿樣品中藥物及其代謝物的含量；研究了藥物的生物轉(zhuǎn)化和代謝途徑，闡明了藥動學(xué)參數(shù)，為進(jìn)一步研究白芷的體內(nèi)代謝奠定基礎(chǔ)。
　　 第四部分、白芷有效成分蛇床夫內(nèi)酯的排泄研究
　　 目的：考察香豆素類化合物蛇床夫內(nèi)酯的膽汁、糞便排泄動力學(xué)，并同時測定膽汁和糞便中蛇床夫內(nèi)酯的代謝物的含量，以完善蛇床夫內(nèi)酯的體內(nèi)代謝研究。
　　 方法：大鼠灌胃蛇床夫內(nèi)酯后分別收集膽汁和糞便，樣品處理后，以

10、0.5‰的甲酸甲醇-0.5‰的甲酸水作為流動相，茴芹內(nèi)酯作為內(nèi)標(biāo)，正離子模式下檢測蛇床夫內(nèi)酯及其兩個代謝產(chǎn)物的含量，研究膽汁和糞便中蛇床夫內(nèi)酯的經(jīng)時變化以及轉(zhuǎn)化情況。
　　 結(jié)果：經(jīng)膽汁和尿液排泄動力學(xué)表明，大鼠口服蛇床夫內(nèi)酯后22h內(nèi)蛇床夫內(nèi)酯原形藥物經(jīng)膽汁排泄完全，排泄量主要集中在0～6h，約占總排泄量的80％，經(jīng)膽汁排泄的排泄總量不到總給藥量1.95％;而在糞便中則需要36h以上才能排泄完全，排泄量主要集中在0～24h，約