中藥矮地茶質量控制與體內代謝及舒血寧注射液的多組分測定與藥動學研究.pdf

1、矮地茶為傳統(tǒng)中藥，來源于紫金?？浦参镒辖鹋５母稍锶辏蛰d于《中國藥典》第一部，具有化痰止咳，利濕，活血之功效。現(xiàn)代臨床藥理研究表明矮地茶中的某些有效成分具有抗炎、抗病毒、抗菌、預防支氣管哮喘等作用。研究表明，矮地茶中含有兒茶素類、黃酮類、酚酸類、異香豆素類和揮發(fā)油類等成分。為了更好的使用這種藥物和增加臨床安全性，迫切需要建立一種同時分析測定矮地茶中有效成分的方法以對其進行質量控制。巖白菜素為矮地茶藥材中含量較高的活性成分之一，研究表明

2、，它具有抗炎、抗肝毒、免疫調節(jié)、抗?jié)儭⒖寡趸?、抗HIV和精神保護的作用等多種藥理作用?！吨腥A人民共和國藥典》已將其收為鎮(zhèn)咳祛痰藥，主要用于慢性支氣管炎。為了更好地使用該藥物有必要對巖白菜素進行體內代謝研究。舒血寧注射液為銀杏葉提取制成的滅菌水溶液，主治擴張血管，改善微循環(huán)，用于缺血性心腦血管疾病、冠心病、心絞痛、腦栓塞、腦血管痙攣等。其主要活性成分為內酯類（銀杏內酯A、B、C和白果內酯），黃酮類化合物（以異鼠李素、槲皮素和山奈酚為苷元

3、的苷）。對銀杏內酯和黃酮類成分進行多組分測定及藥代動力學可以為舒血寧的藥理作用和臨床療效研究提供可靠依據(jù)。
　　 液相色譜-質譜聯(lián)用技術(LC-MS)具有專屬性高、快速靈敏等優(yōu)點，是目前化學成分定性和定量分析的有力工具。本研究采用LC-MS技術建立矮地茶藥材中10種有效成分定量分析方法，為其質量控制提供新的方法和手段;確認大鼠口服巖白菜素的代謝產(chǎn)物，建立血漿、膽汁和尿液樣品中巖白菜素及其代謝物的LC-MS定量分析方法，探索其藥代

4、動力學參數(shù)和排泄動力學特征;建立HPLC-MS法同時測定舒血寧注射液中萜類內酯和黃酮醇苷的含量;建立尾靜脈注射給予大鼠舒血寧注射液后，不同時間點的大鼠血漿中銀杏黃酮和內酯的血藥濃度的定量分析方法，以闡明其藥代動力學特征。
　　 第一部分HPLC-MS法同時測定中藥矮地茶中10種有效成分
　　 目的:建立一種快速、準確、可同時測定矮地茶中10種化學成分(3種兒茶素類、4種黃酮、2種酚酸和1種異香豆素類)的HPLC-ESI-

5、MS分析方法，并用于不同于產(chǎn)地矮地茶藥材的分析。
　　 方法:色譜條件:色譜柱:Diamonsil-C18(150mm×4.6mm，5μm,Dikma);流動相:甲醇-0.2‰甲酸水(v/v)。梯度洗脫;流速:0.8mL/min。質譜條件:ESI源;負離子模式監(jiān)測;源噴射電壓(IS):-4500V;離子源溫度:500℃。霧化氣(Gas1):40psi，加熱氣(Gas2):50psi，簾氣:25psi。由MRM-IDA-EPI模式

6、對10種化合物結構進行確證，采用MRM掃描模式建立其含量測定方法，用所建立的方法對25批不同產(chǎn)地的矮地茶藥材進行定量測定，采用聚類分析和主成分分析進行統(tǒng)計分析。
　　 結果:10種化學成分的峰面積與濃度在測定濃度范圍內均具有良好的線性關系，檢測限、定量限、精密度和穩(wěn)定性均符合要求。加樣回收率范圍為97.7％-103.6％，RSD為0.43％-3.32％。樣品測定結果表明，不同產(chǎn)地矮地茶有效成分的含量差異較大，采用聚類分析和主成分

7、分析等統(tǒng)計方法分析表明，矮地茶的道地藥材（來自于湖南、河北和廣東）與對照藥材趨于一致。
　　 結論:本法簡便、快速、靈敏度高、專屬性好，可用于矮地茶中沒食子酸、表兒茶素、巖白菜素、原兒茶酸、表沒食子兒茶素沒食子酸酯、表兒茶素沒食子酸酯、楊梅苷、蘆丁、楊梅素、槲皮素的含量測定，可為矮地茶藥材質量控制提供一個強有力的工具。
　　 第二部分HPLC-MS法測定大鼠血漿、膽汁和尿液中巖白菜素及其葡萄糖醛酸結合物的濃度
　　

8、 目的:建立一種LC-MS法測定大鼠血漿、膽汁和尿液中巖白菜素及其葡萄糖醛酸代謝物的方法。
　　 方法:血漿、膽汁和尿液三種生物樣品采用沉淀蛋白的處理方法，用酶水解法將巖白菜素的結合型代謝物轉化為其原形藥物進行測定。HPLC-MS法采用ESI源，負離子MRM模式監(jiān)測。以磺胺甲嗯唑為內標，C18（250×4.6mm，5μm）色譜柱，甲醇-0.5％甲酸水(v/v)為流動相。按照12mg/kg的劑量給SD大鼠灌胃巖白菜素的羧甲基纖維

9、素鈉混懸液，于給藥后5，30，60，90，100，120，150，180，240，360，480和720min取血，24h內取膽汁樣品，48h內收集尿液，分別測定巖白菜素及其葡萄糖醛酸結合物的濃度。
　　 結果:結果表明，巖白菜素在體內迅速吸收并轉化為及其葡萄糖醛酸結合物，半衰期為0.36h。巖白菜素的排泄百分比為52.51％，其中膽汁占20.31％(24h)，尿液占32.20％(48h)。
　　 結論:建立了一種靈敏度

10、高、專屬性強的HPLC-MS法測定大鼠血漿、膽汁和尿液中巖白菜素及其葡萄糖醛酸代謝物的濃度。該方法操作簡便，分析時間短，可用于巖白菜素及其制劑的藥代動力學和排泄動力學研究。
　　 第三部分HPLC-MS法同時測定舒血寧注射液中萜類內酯和黃酮醇苷的含量
　　 目的:建立HPLC-MS法同時測定舒血寧注射液中銀杏內酯A、銀杏內酯B、銀杏內酯C、白果內酯以及槲皮素、異鼠李素和山柰酚的含量。
　　 方法:采用DikmaD

11、iamonsilC18色譜柱(150mm×4.6mm，5μm)，柱溫30℃，以乙腈-0.05％甲酸水(v/v)溶液為流動相進行梯度洗脫，流速0.8mL/min，進樣量10μL;采用電噴霧離子源進行負離子模式監(jiān)測，多反應監(jiān)測模式(MRM)用于定量分析，源噴射電壓為-4500V，離子源溫度為650℃。銀杏內酯A、銀杏內酯B、銀杏內酯C、白果內酯以及槲皮素、異鼠李素和山柰酚的檢測離子對分別為453.1/351.2，423.1/367.0，43

12、9.0/383.0,325.0/163.1,301.0/150.9,315.1/300.0和284.9/93.0。
　　 結果:在7min內舒血寧注射液中萜類內酯和黃酮類成分完全分離;峰面積與濃度呈良好的線性關系;加樣回收率為97.7％-101.5％，精密度RSD為0.57％-1.20％。
　　 結論:建立HPLC-MS法測定舒血寧注射液中7種成分的含量，方法具有良好的重復性、回收率和精密度，可用于舒血寧注射液的質量控制

13、。
　　 第四部分HPLC-MS法同時測定大鼠血漿中萜類內酯和黃酮成分及其藥動學研究
　　 目的:建立一種快速的液質聯(lián)用法測定大鼠血漿中萜類內酯（白果內酯、銀杏內酯A、B和C）和黃酮類成分（異鼠李素、槲皮素和山奈酚），并用于大鼠尾靜脈注射給予舒血寧注射液后的藥動學研究。
　　 方法:收集大鼠尾靜脈注射給予舒血寧注射液后的的血漿樣品，用液液萃取的方法進行樣品分析。采用迪馬C18（150mm×4.6mmi.d.，5μ

14、m）柱，乙腈-0.05％甲酸水(v/v)作為流動相梯度洗脫，磺胺甲噁唑(SMZ)為內標，流速0.8mL/min，進樣量10μL。采用電噴霧離子源(ESI)，負離子掃描，多反應監(jiān)測(MRM)模式進行檢測。
　　 結果:該方法檢測限、定量限、精密度和準確度均符合要求，血漿中內酯類和黃酮類成分在測定濃度范圍內均具有良好的線性關系。結果表明，7種成分的藥動學特征趨勢基本一致，但白果內酯的消除速率常數(shù)為0.024，較其它6種成分（Ke在0