突變減毒志賀樣毒素Ⅰ用于抗腫瘤的應用基礎研究.pdf

1、天津醫(yī)科大學博士學位論文突變減毒志賀樣毒素Ⅰ用于抗腫瘤的應用基礎研究姓名：魏楓申請學位級別：博士專業(yè)：腫瘤學指導教師：郝希山任秀寶20070501天津醫(yī)科大學博士學位論文可以被StxlB亞基抗體阻斷。體外實驗觀察到不同劑量的突變減毒Stxl真核表達載體轉染可以使人卵巢癌SKOV3細胞的細胞周期阻滯于G2／M或S期，轉染后SKOV3細胞死亡的主要途徑是壞死。突變減毒Stxl還能夠抑制HUVEC的增殖、遷移能力和管腔形成能力。體內實驗顯示突

2、變減毒Stxl真核表達載體可以抑制裸鼠體內SKOV3移植瘤生長，并能夠明顯減少裸鼠體內SKOV3移植瘤的微血管密度。確定選用毒性為原毒素毒性1／100和1／1000的突變減毒Stxl編碼序列用于攜帶突變減毒Stxl編碼序列的腺病毒載體的構建，并已成功構建出相應的重組腺病毒。結論：第一，成功構建了編碼1／10、1／100減毒活性的突變減毒Stxl的真核表達載體。第二，成功建立了分泌性表達突變減毒Stxl的CHO細胞株，揭示了減毒Stxl基

3、因轉染后的作用機制，證實StxlA、B亞基的天然信號肽可以被真核細胞識別，從而使該毒素能夠被基因轉移后的真核細胞分泌。第三，發(fā)現(xiàn)減毒Stxl基因轉染可導致人卵巢癌細胞SKOV3細胞的細胞周期阻滯并可引起SKOV3細胞壞死。提示突變減毒Stxl抗腫瘤的機制至少包括引起腫瘤細胞壞死和誘導腫瘤細胞周期阻滯。第四，證明1／10、1／100減毒活性的突變減毒Stxl具有明顯的抗腫瘤血管生成活性，體外實驗中能夠有效地抑制HUVEC的生長及正常功能的

4、發(fā)揮，體內實驗中突變減毒Stxl真核表達載體可以抑制裸鼠體內SKOV3移植瘤的血管生成。提示抗血管生成活性可能在減毒Stxl抑制腫瘤生長的作用中占據(jù)重要地位。第五，成功構建了攜帶1／100、1／1000減毒活性的突變減毒Stxl編碼序列的重組腺病毒載體，為進一步研究不同減毒活性的突變減毒Stxl的抗腫瘤作用及其機制提供了重要工具?？傊?，本研究證明減毒Stxl能夠通過抗腫瘤增殖作用和抗血管生成作用來抑制腫瘤生長，這一結果提示減毒Stxl基