炎癥介質白三烯D4在慢性乙型肝炎和原發(fā)性肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用.pdf

1、本研究分為兩部分。
　　 第一部分：慢性乙型肝炎和原發(fā)性肝癌患者血清中LTD4水平及其臨床意義。
　　 目的：研究Leukotriene D4(LTD4)在慢性乙型肝炎(CHB)和原發(fā)性肝癌(HCC)患者血清中的表達水平，并分析其與血清ALT、AST、γ-GT、HBV-DNA和AFP間的相關性，進而探討LTD4在CHB和HCC發(fā)生發(fā)展中的作用。
　　 方法：選取CHB患者21例(男16例，女5例，平均年齡37.6

2、±12.7歲)，其中慢性肝炎14例、慢性重型肝炎7例；HCC患者71例(男64例，女7例，平均年齡48.9±11.1歲)，其中合并HBV者62例；及健康體檢者(對照組)20例為研究對象。應用酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測血清中LTD4水平，全自動生化儀檢測ALT、AST、γ-GT水平，化學發(fā)光儀和基因擴增儀分別檢測AFP和HBV-DNA。
　　 結果：CHB和HCC患者血清LTD4水平均明顯高于對照組(P<0.01)，且其水平在C

3、HB組、HCC合并HBV組、單獨HCC組及對照組中逐漸下降。在CHB中，慢性肝炎與重型肝炎比較，LTD4水平差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；且LTD4水平與ALT、AST、γ-GT及HBV-DNA含量間無相關性(P>0.05)。在HCC中，合并HBV組與單獨HCC組相比，LTD4水平有顯著性差異(P<0.01)；分別比較轉移組與無轉移組、治療組與未治療組，結果差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；LTD4水平僅與ALT呈正相關(P<0.

4、05)，而與AST、γ-GT、AFP無相關性(P>0.05)。
　　 結論：LTD4作為重要的炎癥介質，可能參與了CHB的發(fā)生發(fā)展，并在促進CHB向HCC進展的過程中起著一定的作用，而且對肝癌細胞自身的腫瘤生物學產生影響。
　　 第二部分：LTD4對人肝癌細胞細胞增殖、周期、凋亡及遷移的影響。
　　 目的：研究LTD4對肝癌細胞的增殖、周期、凋亡及遷移的影響，探討其在HCC發(fā)生發(fā)展機制方面的作用。
　　

5、方法：培養(yǎng)人肝癌細胞系SMMC-7721細胞進行實驗，不同濃度LTD4處理細胞24h、48h、72h后，采用CCK-8法測定SMMC-7721細胞的增殖活性及LTD4拮抗劑對細胞增殖的抑制作用；流式細胞術檢測細胞周期變化；Annexin V/PI雙標法檢測細胞凋亡變化；8 μm Transwell法檢測肝癌細胞的遷移作用。
　　 結果：在1nmol/L處LTD4作用48h時促進SMMC-7721細胞的增殖作用最強(P＜0.01)

6、，可達59％；抑制劑MK571濃度在10-8-10-6mol/L時可部分拮抗LTD4，而在10-5mol/L處能明顯抑制細胞生長(P＜0.05)；LTD4在有效濃度內作用SMMC-7721細胞后，M1/M2期細胞的比例明顯下降(P＜0.05)，促進細胞周期從M1期向M2期分化，呈劑量依賴性；其次，它可明顯抑制細胞凋亡(P<0.05)，以早期凋亡為主，呈劑量依賴性；此外，LTD4還誘導癌細胞的遷移(P<0.05)，其促進作用亦呈劑量依賴性