Ang-（1-7）對(duì)AngⅡ誘導(dǎo)培養(yǎng)的乳鼠心肌細(xì)胞生長情況的影響.pdf

1、目的：通過觀察Ang-(1-7)對(duì)AngⅡ誘導(dǎo)培養(yǎng)的乳鼠心肌細(xì)胞生長情況的影響，探討Ang-(1-7)對(duì)培養(yǎng)心肌細(xì)胞的保護(hù)作用及其機(jī)制。 方法：采用胰酶消化法和差速貼壁法分離出新生1-3天內(nèi)的SD大鼠心肌細(xì)胞，用含20％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液進(jìn)行體外培養(yǎng)，4天后用α-sarcmeric-actin兔抗鼠多克隆抗體免疫細(xì)胞化學(xué)方法結(jié)合顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)及自發(fā)性搏動(dòng)情況進(jìn)行心肌細(xì)胞純度鑒定，同時(shí)分組加藥干預(yù)： ①正常對(duì)照

2、組：培養(yǎng)液中不加干預(yù)因素； ② AngⅡ組：培養(yǎng)液中加入Ang Ⅱ至終濃度10<'-7>mol/L； ③ AngⅡ+Ang-(1-7)組：培養(yǎng)液中加入AngⅡ至終濃度10<'-7>mol/L，Ang-(1-7)至終濃度10<'-6>mol/L。 加藥繼續(xù)培養(yǎng)2天后顯微鏡下測(cè)量細(xì)胞表面積，用免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)心肌細(xì)胞BFGF和Bcl-2、Bax基因蛋白含量，流式細(xì)胞儀檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡率。 結(jié)果 1

3、．心肌細(xì)胞鑒定：顯微鏡下觀察，心肌細(xì)胞貼壁生長，呈梭形或多角形，大部分細(xì)胞可見自律性搏動(dòng)，結(jié)合α-sarcmeric-actin免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)，心肌細(xì)胞純度達(dá)95％以上。 2．心肌細(xì)胞表面積檢測(cè)：AngⅡ組細(xì)胞平均表面積較正常對(duì)照組明顯增大，AngⅡ+Ang-(1-7)組細(xì)胞表面積較AngⅡ組明顯減小，但仍大于正常對(duì)照組，上述差別均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 3．BFGF免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)灰度分析：AngⅡ組細(xì)胞BFGF表達(dá)灰

4、度值較正常對(duì)照組明顯增加，AngⅡ+Ang-(1-7)組BFGF表達(dá)灰度值較AngⅡ組明顯減小，但仍大于正常對(duì)照組，上述差別均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 4．Bcl-2、Bax基因蛋白免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)灰度分析：AngⅡ組細(xì)胞Bcl-2表達(dá)灰度值較正常對(duì)照組明顯減少，Bax表達(dá)灰度值較正常對(duì)照組明顯增加；AngⅡ+Ang-(1-7)組與AngⅡ組比較，Bcl-2表達(dá)灰度值下降水平減輕， Bax表達(dá)灰度值升高水平亦減輕；上述差別均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

5、義。 5．流式細(xì)胞儀檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡率：AngⅡ組細(xì)胞凋亡率較正常對(duì)照組明顯增加，AngⅡ+Ang-(1-7)組細(xì)胞凋亡率較AngⅡ組明顯降低，但仍高于正常對(duì)照組，上述差別均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論 1．AngⅡ可促進(jìn)體外培養(yǎng)的乳鼠心肌細(xì)胞生長肥大，Ang-(1-7)可拮抗AngⅡ的促心肌細(xì)胞肥大作用； 2．AngⅡ可增加體外培養(yǎng)的乳鼠心肌細(xì)胞BFGF表達(dá)，Ang-(1-7)可拮抗AngⅡ的促BFGF表達(dá)作