Ang-（1-7）對AngⅡ誘導培養(yǎng)的乳鼠心肌細胞生長情況的影響.pdf

1、目的：通過觀察Ang-(1-7)對AngⅡ誘導培養(yǎng)的乳鼠心肌細胞生長情況的影響，探討Ang-(1-7)對培養(yǎng)心肌細胞的保護作用及其機制。 方法：采用胰酶消化法和差速貼壁法分離出新生1-3天內(nèi)的SD大鼠心肌細胞，用含20％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液進行體外培養(yǎng)，4天后用α-sarcmeric-actin兔抗鼠多克隆抗體免疫細胞化學方法結(jié)合顯微鏡下觀察細胞形態(tài)及自發(fā)性搏動情況進行心肌細胞純度鑒定，同時分組加藥干預： ①正常對照

2、組：培養(yǎng)液中不加干預因素； ② AngⅡ組：培養(yǎng)液中加入Ang Ⅱ至終濃度10<'-7>mol/L； ③ AngⅡ+Ang-(1-7)組：培養(yǎng)液中加入AngⅡ至終濃度10<'-7>mol/L，Ang-(1-7)至終濃度10<'-6>mol/L。 加藥繼續(xù)培養(yǎng)2天后顯微鏡下測量細胞表面積，用免疫細胞化學方法檢測心肌細胞BFGF和Bcl-2、Bax基因蛋白含量，流式細胞儀檢測心肌細胞凋亡率。 結(jié)果 1

3、．心肌細胞鑒定：顯微鏡下觀察，心肌細胞貼壁生長，呈梭形或多角形，大部分細胞可見自律性搏動，結(jié)合α-sarcmeric-actin免疫細胞化學方法檢測，心肌細胞純度達95％以上。 2．心肌細胞表面積檢測：AngⅡ組細胞平均表面積較正常對照組明顯增大，AngⅡ+Ang-(1-7)組細胞表面積較AngⅡ組明顯減小，但仍大于正常對照組，上述差別均具有統(tǒng)計學意義。 3．BFGF免疫細胞化學檢測灰度分析：AngⅡ組細胞BFGF表達灰

4、度值較正常對照組明顯增加，AngⅡ+Ang-(1-7)組BFGF表達灰度值較AngⅡ組明顯減小，但仍大于正常對照組，上述差別均具有統(tǒng)計學意義。 4．Bcl-2、Bax基因蛋白免疫細胞化學檢測灰度分析：AngⅡ組細胞Bcl-2表達灰度值較正常對照組明顯減少，Bax表達灰度值較正常對照組明顯增加；AngⅡ+Ang-(1-7)組與AngⅡ組比較，Bcl-2表達灰度值下降水平減輕， Bax表達灰度值升高水平亦減輕；上述差別均具有統(tǒng)計學意

5、義。 5．流式細胞儀檢測心肌細胞凋亡率：AngⅡ組細胞凋亡率較正常對照組明顯增加，AngⅡ+Ang-(1-7)組細胞凋亡率較AngⅡ組明顯降低，但仍高于正常對照組，上述差別均具有統(tǒng)計學意義。 結(jié)論 1．AngⅡ可促進體外培養(yǎng)的乳鼠心肌細胞生長肥大，Ang-(1-7)可拮抗AngⅡ的促心肌細胞肥大作用； 2．AngⅡ可增加體外培養(yǎng)的乳鼠心肌細胞BFGF表達，Ang-(1-7)可拮抗AngⅡ的促BFGF表達作