抗血小板藥物對高血壓大鼠微循環(huán)及血管重構的作用和炎癥內皮微粒對內皮通透性的作用研究.pdf

1、目的:第一部分:探討抗血小板藥物氯吡格雷對自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)微循環(huán)及血管重構的作用。第二部分:探討炎癥因子C反應蛋白刺激人臍靜脈內皮細胞產生的內皮微粒對體外培養(yǎng)單層內皮細胞通透性的作用。
　　方法:第一部分:SPF級雄性13周齡SHR隨機分為溶劑對照組、氯吡格雷組、奧美拉唑組及兩藥混合組，每組5只，分別灌胃1 mL0.5％羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)、氯吡格雷溶液(10mg/kg)、奧美拉唑溶液（20mg/kg）及兩藥混

2、合溶液，每日一次。連續(xù)四周后，首先用高功率激光多普勒血流探測儀(LDF)檢測大鼠腦皮質、耳廓及趾血流量、血細胞聚集度和血流速度，用血流成像儀(LDPI)觀察腦血流分布狀態(tài);取溶劑對照組和氯吡格雷組大鼠的腦和主動脈固定，利用HE染色觀察主動脈管壁厚度、管壁面積、管腔面積及管壁平滑肌、利用HE染色觀察腦微血管數(shù)及利用免疫組化方法檢測腦皮質血管內皮細胞CD31表達量等血管重構和微血管稀疏情況。采用SPSS17.0統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計學分析和比較

3、。
　　第二部分:體外培養(yǎng)人臍帶靜脈內皮細胞株(HUVEC)，以倒置顯微鏡觀察細胞生長過程并繪制細胞生長曲線。HUVEC經不同濃度C反應蛋白(0、25、50、75μg/mL)作用12h，收集細胞培養(yǎng)液以制備內皮微粒。利用流式細胞儀檢測CD62E+內皮微粒的百分率;利用Transwell系統(tǒng)檢測內皮微粒對HUVEC通透性的影響;利用免疫熒光染色觀察不同濃度內皮微粒對HUVEC肌動蛋白F-actin的表達影響。
　　結果:第一部

4、分:氯吡格雷組高血壓大鼠的腦皮質、耳廓和趾血流量顯著高于溶劑對照組（P值分別＜0.05、0.01和0.05）;氯吡格雷組高血壓大鼠的耳廓和趾血流速度顯著高于溶劑對照組（P值分別＜0.001和0.05）;氯吡格雷組高血壓大鼠腦血流分布曲線與溶劑對照組相比整體右移，其腦高血流量（800-1500 PU）面積百分比顯著高于溶劑對照組(P＜0.01);本實驗結果中，奧美拉唑在對微循環(huán)作用中并未顯示對氯吡格雷改善微循環(huán)的減效作用。氯吡格雷組大鼠主

5、動脈管壁厚度及面積明顯低于溶劑對照組（P＜0.05），血管平滑肌增殖較溶劑對照組有所改善，排列相對連續(xù)工整，管腔面積與管壁面積比值明顯高于溶劑對照組（P＜0.05），氯吡格雷組大鼠腦皮質內微血管數(shù)明顯高于溶劑對照組(P＜0.05)，血管CD31表達量明顯高于溶劑對照組(P＜0.05)。
　　第二部分:細胞接種8h后完全貼壁，6d后細胞融合可達80-90％，其中2-4d為細胞對數(shù)生長期，數(shù)目明顯增多，體積增大，胞漿豐富，其他時間則變

6、化不明顯;與對照組相比，梯度濃度C反應蛋白(25、50、75μg/mL)可以刺激HUVEC產生更高的CD62E+內皮微粒，其中50和75μg/mL兩個濃度有顯著差異（P值分別＜0.01和0.05）;與對照組相比，不同濃度內皮微粒（2500、5000、10000個/mL）使HUVEC通透性在15、30、60、90 min時刻顯著增高（P值均分別＜0.01、0.05和0.001）;與對照組相比，隨著刺激HUVEC的內皮微粒濃度升高，F(xiàn)-ac

7、tin由細胞周圍和細胞連接處向細胞內遷移，致密外周束逐漸減少，應力纖維和中央短纖維逐漸增粗增多。
　　結論:第一部分:氯吡格雷能夠明顯改善高血壓大鼠體表和腦微循環(huán)，其機制可能與改善血管重構及有效增加微血管數(shù)量相關，有利于高血壓預后和降低心腦血管并發(fā)癥的發(fā)生。
　　第二部分:在炎癥因子C反應蛋白刺激下內皮細胞產生了特定表型的內皮微粒，以這種內皮微粒再作用于正常內皮細胞，可導致正常內皮細胞的細胞通透性發(fā)生顯著變化，這種改變會對進