可緩釋生物活性蛋白的無(wú)細(xì)胞組織工程真皮的構(gòu)建研究.pdf

1、目前，組織工程真皮材料依其成分可分為含有細(xì)胞和不含細(xì)胞兩大類。前者如Dermagraff類，雖然它們?cè)谂R床試驗(yàn)中都占有一席之地，但畢竟存在獲取較難、使用不便及潛在的抗原性等不利因素，而且值得注意的是，類似的這些組織工程皮膚產(chǎn)品雖然有些已在美國(guó)通過(guò)認(rèn)證，如Transcyte等，但在歐洲尚沒(méi)有得到認(rèn)可。如此，不含細(xì)胞類的真皮替代物又開(kāi)始逐漸受到了重視，這其中又主要包括脫細(xì)胞真皮替代物(ADM)和無(wú)細(xì)胞真皮替代物兩大類，但在ADM中，如All

2、oderm也不能對(duì)抗原成分做到完全意義的去除，且來(lái)源有限、結(jié)構(gòu)致密。考慮到人工材料具有可塑性、可控降解性等優(yōu)點(diǎn)，本課題的研究目標(biāo)即為采用生物高分子材料構(gòu)建一種無(wú)細(xì)胞成分的組織工程真皮支架，并在本實(shí)驗(yàn)室研發(fā)的新型戰(zhàn)傷止血材料明膠-殼聚糖-PVA材料的工作基礎(chǔ)上，對(duì)其工藝進(jìn)行進(jìn)一步改進(jìn)，再結(jié)合種子細(xì)胞的有效培養(yǎng)上清成份即活性蛋白，使其不但在真皮的缺損重建方面更具優(yōu)勢(shì)，而且以其經(jīng)濟(jì)可靠、攜帶和使用方便的特點(diǎn)為戰(zhàn)傷急救敷料的進(jìn)一步研究應(yīng)用打下了

3、較好的基礎(chǔ)。 目的：本研究制備的真皮缺損修復(fù)材料主要希望達(dá)到以下幾點(diǎn)：①有良好的生物相容性，可塑性強(qiáng)，可促進(jìn)受損真皮組織創(chuàng)面的愈合；②緩釋系統(tǒng)釋放的生物活性蛋白對(duì)真皮重建有促進(jìn)作用；③簡(jiǎn)單易用，成本較低，可用于平戰(zhàn)時(shí)的皮膚創(chuàng)傷急救。 方法：首先確定以明膠、殼聚糖、PVA為主要原料混合冷凍干燥制備復(fù)合材料的方法，并進(jìn)一步依據(jù)材料的綜合性能優(yōu)化原料配比工藝并觀察研究其用于皮膚創(chuàng)傷模型的修復(fù)效果。另外，在成纖維細(xì)胞(Fb)的培

4、養(yǎng)上清中分析出有效的生長(zhǎng)因子類活性組分并確定其大量提取的工藝，最后結(jié)合明膠微球緩釋系統(tǒng)以期制備成具有促愈合作用的急救類真皮修復(fù)材料。 結(jié)果：明膠、殼聚糖和PVA以5％∶2％∶5％濃度用8∶4∶1的比例混合凍干制備的復(fù)合材料有較好的修復(fù)效果，且MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示材料無(wú)明顯細(xì)胞毒性，為最終確定的真皮支架材料的制備方法；采用超濾離心法成功的提取了成纖維細(xì)胞培養(yǎng)上清中的有效活性蛋白，各種檢測(cè)結(jié)果表明，上清液中大于10KD的因子組合比較適

5、于真皮Fb的生長(zhǎng)，尤其是10～30KD組對(duì)其促增殖的表現(xiàn)更有優(yōu)勢(shì)；而5～30KD的因子組合更適于對(duì)表皮細(xì)胞的生長(zhǎng)，尤其5～10KD組對(duì)其單純的增殖有著明顯的促進(jìn)作用；采用改良的乳化冷凝法制備了明膠微球(GMS)緩釋系統(tǒng)，對(duì)其一般性質(zhì)進(jìn)行了觀測(cè)，并發(fā)現(xiàn)其復(fù)合一定濃度的上清因子對(duì)Fb有較好的持續(xù)促增殖的作用；在復(fù)合活性蛋白的支架材料對(duì)豬皮膚全層缺損修復(fù)作用的研究中，無(wú)論從大體觀察還是組織學(xué)觀察，實(shí)驗(yàn)組不但較空白對(duì)照組愈合效果明顯，而且已接近

6、自體皮膚移植組的愈合效果。 結(jié)論：明膠、殼聚糖和PVA以適當(dāng)?shù)谋壤旌峡梢試L試作為真皮支架材料；＞10KD的成纖維細(xì)胞培養(yǎng)上清組分尤其對(duì)真皮的重建有積極的作用，復(fù)合控釋系統(tǒng)后克服了生長(zhǎng)因子半衰期短，其進(jìn)入體內(nèi)后迅速擴(kuò)散、變性或酶解，應(yīng)用效果不甚理想的弊病，既可避免毒副作用，又能加快上皮和結(jié)締組織生長(zhǎng)；同時(shí)加入明膠-殼聚糖-PVA凍干材料這一載體進(jìn)一步加強(qiáng)了對(duì)真皮缺損愈合的能力，使之為平戰(zhàn)時(shí)皮膚創(chuàng)傷修復(fù)的臨床應(yīng)用奠定了一定的基礎(chǔ)。