2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
   成年和老年食物限制(food restriction,FR)可以產(chǎn)生許多有益的生物學效應,包括延長了生命周期、延緩衰老和疾病的進程、提高學習和記憶能力及降低藥物的毒性等。然而,圍產(chǎn)期食物限制可導致胎兒宮內(nèi)發(fā)育受限(intrauterinegrowth restriction,IUGR),主要表現(xiàn)為新生兒出生后體重降低、生長緩慢、學習成績不良。實驗動物研究表明,圍產(chǎn)期食物限制或營養(yǎng)不良除導致體重降低、生長緩慢外,還表

2、現(xiàn)為一些行為發(fā)育延遲及成年社會行為和空間學習能力下降等。由于圍產(chǎn)期營養(yǎng)不良對人類的生命和健康有極大危害,因此研究其對大鼠出生后神經(jīng)行為發(fā)育(發(fā)育轉折點)及對認知能力的影響有利于進一步認識人類IUGR并為發(fā)展保護人類胎兒IUGR的策略提供有益的資料。本研究首先建立圍產(chǎn)期50%食物限制(FR50)Wistar大鼠模型,之后分別觀察圍產(chǎn)期FR50對新生期子代雌雄大鼠神經(jīng)行為發(fā)育(包括身體發(fā)育和神經(jīng)反射)的影響。由于新生期神經(jīng)行為發(fā)育的延遲或損

3、傷往往與后期(包括幼年和成年)的認知行為下降有關,因此又研究了子代成年雄性大鼠空間學習與記憶能力、海馬CA1區(qū)突觸可塑性及海馬一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)陽性神經(jīng)元密度的變化,以揭示認知行為變化的可能機制。
   方法:
   實驗第一部分:圍產(chǎn)期50%食物限制大鼠模型的建立。為了研究圍產(chǎn)期營養(yǎng)不良對神經(jīng)行為發(fā)育和認知能力的影響,需要有合適的動物模型。通常有蛋白限制法和食物限制法。鑒

4、于前者在飼料制作方面困難,所以采用后者制作模型。根據(jù)食物限制的程度,通常又分為輕度(30%)、中度(50%)和重度(70%)食物限制法。本研究采用了中度食物限制法。健康成年(體重250-280 g)14周齡wistar雌鼠與雄鼠同籠(雌雄比2-3:1)。之后,每日早晨檢查雌鼠陰道口或陰道涂片,發(fā)現(xiàn)陰道栓或陰道涂片中有大量精子存在記為大鼠妊娠第0天(embryonic day0,E0),分籠喂養(yǎng)。將妊娠的雌鼠隨機分為對照組(n=18)和模

5、型組(n=16)。對照組自由攝食,并記錄每日飼料消耗量。模型組從妊娠的E0到E6自由攝食,從妊娠的E7到仔鼠出生的21天(postnatal day21,PD21)進行食物限制,食物限制量為對照組大鼠每日平均飼料消耗量的50%。兩組孕鼠均予充足飲水。分別于妊娠的E1、E7、E14和E21測定孕鼠體重。大鼠自然分娩,仔鼠出生的當天記為PD0,分別于仔鼠出生的PD1、PD7、PD10、PD14和PD21稱重。發(fā)現(xiàn)FR50新生仔鼠體重明顯低于

6、正常組新生鼠,且孕鼠E14和E21體重也明顯低于正常組孕鼠。表明本實驗方法模擬了圍產(chǎn)期營養(yǎng)不良狀態(tài),成功復制出胎鼠IUGR,有助于下一步研究新生子代大鼠神經(jīng)行為發(fā)育及圍產(chǎn)期營養(yǎng)不良狀態(tài)對認知能力的影響。
   實驗第二部分:圍產(chǎn)期食物限制對子代新生Wistar大鼠神經(jīng)行為發(fā)育的影響。以肛殖距判斷仔鼠的性別。典型的神經(jīng)行為發(fā)育評估包括身體生長和神經(jīng)反射兩部分。身體生長包括開耳(PD2-PD5)、睜眼(PD14-PD17)、門齒生長

7、(PD8-PDl2)和毛發(fā)出現(xiàn)(PD11-PD14)。神經(jīng)反射包括翻正反射(PD3-PD7)、負性趨地反射(PD6-PD10)和懸崖回避反射(PD4-PD9)。比較對照組和食物限制組新生仔鼠神經(jīng)發(fā)育的變化。
   實驗第三部分:圍產(chǎn)期食物限制對子代成年雄性大鼠空間學習與記憶能力及海馬CA1區(qū)長時程增強(10ng-term potentiation,LTP)的影響。大鼠出生后70天(PD70),運用Morris水迷宮測試空間學習與

8、記憶能力。Morris水迷宮測試包括定位航行實驗(place navigation test)和空間探索(probe trial performance)兩個部分。定位航行實驗歷時5天,每天分上下午兩個時間段訓練。在每個時間段訓練4次,分別從4個坐標象限的中點將大鼠面向池壁輕輕放入水中,記錄大鼠在120 s找到平臺的時間,即逃避潛伏期(escape latency)。若在120 s內(nèi)找不到平臺,則將大鼠引導到平臺上并保持15 s。第6天

9、撤除平臺作空間探索實驗,選與平臺象限相對象限的中點為入水點將大鼠放入水中,記錄120 s內(nèi)大鼠跨越平臺的次數(shù)及在目標象限的搜索時間百分比。之后,在海馬CA1區(qū)在體記錄場興奮性突觸后電位(fEPSP)。單極記錄電極垂直插入海馬CA1區(qū)錐體細胞樹突叢(前囟后3.4 mm,中線旁開2.5 mm),雙極刺激電極插入同側海馬Schaffer側枝(前囟后4.2 mm,中線旁開3.5 mm)。調(diào)整記錄電極及刺激電極深度,至記錄到最大場興奮性突觸后電位

10、(field excitatory postsynaptic potential,fEPSP)為止。海馬CA1區(qū)LTP區(qū)的記錄參數(shù)為:以波寬0.2ms、頻率0.033Hz的測試刺激,作用于大鼠海馬CA3區(qū)Schaffer側枝,誘導海馬CA1區(qū)錐體細胞樹突叢場興奮性突觸后電位(field excitatory postsynaptic potential,fEPSP)。以fEPSP幅度的50%電流強度作為最適刺激強度。記錄30 min f

11、EPSP后進行高頻刺激。高頻刺激由10串200 Hz的方波組成,串間隔2 s。之后,用相同的波寬(頻率0.033Hz)記錄120 min fEPSP。
   實驗第四部分:圍產(chǎn)期食物限制對子代成年雄性大鼠海馬神經(jīng)元型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase,nNOS)陽性細胞密度的影響。由于空間學習與記憶能力的變化及海馬CA1區(qū)LTP的誘導和維持需要興奮性神經(jīng)遞質谷氨酸的釋放。一氧化氮(nitr

12、ic oxide,NO)作為一種逆向信使,促進突觸前神經(jīng)元谷氨酸的釋放,從而易化了在突觸后神經(jīng)元上記錄的LTP。因此,進一步用免疫組化方法觀察海馬三個亞區(qū)nNOS陽性細胞的密度。以期從一氧化氮的角度研究圍產(chǎn)期食物限制消弱了子代空間學習和記憶能力的機制。
   結果:
   1)圍產(chǎn)期食物限制導致新生雌雄大鼠身體生長延遲,包括開耳、門齒生長、毛發(fā)和睜眼延遲。
   2)圍產(chǎn)期食物限制導致雌雄新生大鼠神經(jīng)反射延遲,包

13、括翻正反射和:懸崖回避反射。另外,食物限制還導致雄性新生大鼠負性趨地反射延遲,但不影響雌性新生大鼠負性趨地反射。
   3)圍產(chǎn)期食物限制導致成年雄性子代大鼠空間學習與記憶能力下降。
   4)圍產(chǎn)期食物限制導致成年雄性子代大鼠海馬CA1區(qū)突觸可塑性降低。
   5)圍產(chǎn)期食物限制降低了海馬三個亞區(qū)(CA1區(qū)、CA3區(qū)和齒狀回)nNOS陽性細胞的密度。
   結論:
   1)圍產(chǎn)期食物限制導致新

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