AD相關(guān)基因tau在斑馬魚中的表達(dá)圖譜研究.pdf

1、老年癡呆，也叫阿爾茲海默癥(Alzheimer'sdisease，AD)是神經(jīng)系統(tǒng)的退行性疾病。目前，AD已成為導(dǎo)致老年人死亡的第四位主要原因，僅次于心臟病、癌癥及中風(fēng)。因此，老年癡呆成了世界各國予以攻克的矚目問題。Tau蛋白的異常高度磷酸化是出現(xiàn)PHFs/NFTs的主要原因，導(dǎo)致神經(jīng)纖維內(nèi)微管解聚、變形、扭曲、退化，從而引起老年癡呆。
　　 目前Tau基因已成為阿爾茲海默相關(guān)基因的研究熱點(diǎn)，但是tau基因在斑馬魚中的表達(dá)未見報(bào)

2、道。為研究斑馬魚tau基因的時(shí)空表達(dá)，確定藥物作用靶點(diǎn)，本文選用整體原位雜交的方法，研究tau基因在斑馬魚胚胎中的時(shí)空表達(dá)圖譜。采用RT-PCR技術(shù)，克隆得到tau基因片段，693bp，連接到PGEMT-easy載體上，轉(zhuǎn)化到大腸桿菌中，運(yùn)用菌落PCR鑒定陽性克隆。氨基酸序列分析表明，與人、家鼠、爪蟾的同源性分別達(dá)到65％，63％，57％。通過體外轉(zhuǎn)錄獲得地高辛標(biāo)記的RNA探針，對(duì)各時(shí)期胚胎進(jìn)行原位雜交，結(jié)果顯示tau基因在斑馬魚的早期

3、均一表達(dá)，18體節(jié)之后集中在中后腦表達(dá)，三天后的斑馬魚中沒有明顯表達(dá)。用紅色熒光蛋白標(biāo)記islet的RNA探針，用綠色熒光蛋白標(biāo)記tau的RNA探針，原位雜交，用熒光素分子偶聯(lián)的單克隆抗體與探針分子特異性結(jié)合，熒光顯色劑顯色后在熒光顯微鏡下觀察，準(zhǔn)確定位了tau基因的表達(dá)位置在中后腦，與islet表達(dá)的細(xì)胞不同。
　　 初步篩選了影響該基因表達(dá)的兩種中藥標(biāo)準(zhǔn)品，雖然效果不明顯，但為后期研究該基因的功能和藥物高通量篩選打下了基礎(chǔ)，