利用人子宮內膜異體移植模型對月經(jīng)出血和蛻膜化發(fā)生的初步研究.pdf

1、月經(jīng)是自然界中人和部分靈長類動物以及少數(shù)其它動物(如蝙蝠、大象)所獨有的一種生理現(xiàn)象,是子宮內膜生長、血管增生、腺體生長分泌以及子宮內膜崩解脫落并伴隨出血的生理性周期變化。這種周期性變化正是女性生殖系統(tǒng)的生理特點之一,自上世紀80年代以來,包括我們實驗室在內的國內外的研究者們通過人工給予激素或借助假孕動物模型的方式建立了小鼠月經(jīng)模型,但小鼠并非行經(jīng)動物,因此通過人工外在刺激模擬產(chǎn)生的小鼠月經(jīng)模型并不能夠真正反應人類月經(jīng)發(fā)生和發(fā)展的過程,

2、該模型的運用具有一定的局限性。因此,建立一個人源化的月經(jīng)發(fā)生模型來研究月經(jīng)發(fā)生的細胞和分子生物學基礎具有十分重要的意義。在此月經(jīng)模型基礎之上,探討月經(jīng)出血以及環(huán)氧合酶在月經(jīng)蛻膜化中的作用,本研究的主要內容分為如下三個部分。
　　 我們首先建立人子宮內膜組織異體移植模型。將人子宮內膜組織異種移植到SCID小鼠皮下后,人工給予雌、孕激素。觀察移植后不同時間點,移植組織的形態(tài)和結構變化,激素水平,波形蛋白和角蛋白標志物表達情況,并與在

3、體周期性變化的子宮內膜組織比較。研究表明,組織移植后同樣發(fā)生與在體人子宮內膜相似增殖、分化和崩解的組織形態(tài)學變化。對基質金屬蛋白酶1、2和9的表達,蛻膜化標志物催乳素以及環(huán)氧合酶1和2的表達進行了研究,結果顯示,上述過程與在體人子宮內膜組織和靈長類月經(jīng)研究所揭示的特征相符合。另外,在白細胞浸潤結果發(fā)現(xiàn),不同類型白細胞參與月經(jīng)周期不同階段,發(fā)揮不同的生物學作用。移植子宮內膜組織與小鼠組織形成血管嵌合體。
　　 在前期結果的啟發(fā)下,

4、我們進一步深入探索了環(huán)氧合酶在子宮內膜蛻膜化過程中的作用。在人子宮內膜組織異體移植模型基礎上,一方面在代謝水平層面,給予宿主小鼠環(huán)氧合酶抑制劑吲哚美辛和塞來昔布,觀察蛻膜化發(fā)生程度。結果顯示,COX2對于蛻膜化的啟動是必須的,而對于蛻膜化的維持不是必須的,環(huán)氧合酶抑制劑抑制蛻膜化發(fā)生具有時間特異性。吲哚美辛同時抑制PGE2和PGF2α的合成,由于COX1代償作用,塞來昔布對PGE2和PGF2α的合成未見影響。另一方面,我們進行了分子水平

5、的前期研究工作,主要是建立人子宮內膜組織塊體外慢病毒轉染體系,通過對組織培養(yǎng)條件、轉染條件、病毒數(shù)量等方面進行優(yōu)化,達到了50％的轉染陽性率,為下一步進行RNA干擾下調環(huán)氧合酶基因、以及子宮月經(jīng)發(fā)生的分子機制研究奠定實驗基礎和提供技術保障。
　　 在改良子宮內膜細胞原代分離培養(yǎng)方法的基礎之上,我們將人端粒酶基因通過脂質體轉染的方法導入體外培養(yǎng)的人子宮內膜基質細胞,以建立永生化人子宮內膜基質細胞系。結果表明,原代分離得到的子宮內膜

6、基質和上皮細胞分別達到97％和90％的純度。RT-PCR檢測顯示,通過脂質體傳染的方式,成功地將人端粒酶基因導入細胞,并穩(wěn)定表達。經(jīng)過G418篩選,得到2個單克隆,并擴大傳代培養(yǎng),目前傳至第10代和15代。
　　 綜上所述,我們成功的建立了人子宮內膜異種移植月經(jīng)模型,并初步表明在這個過程中,環(huán)氧合酶在月經(jīng)蛻膜化啟動過程中發(fā)揮著重要的作用,為進一步的完善分子生物學研究模型,我們進行了建立人子宮內膜基質細胞永生化細胞系和體外組織塊慢