SOCCs對DO膀胱逼尿肌細胞興奮性和收縮性調控的初步研究.pdf

1、目的:
　　膀胱過度活動癥(Overactive bladder,OAB)是一種常見的泌尿外科疾病,其定義為:OAB是一種以尿急癥狀為特征的癥候群,常常伴有尿頻和夜尿癥狀,可伴或不不伴有急迫性尿失禁,OAB可獨立發(fā)生,也可與其他泌尿系統(tǒng)疾病(如尿路感染、老年性排尿異常、神經(jīng)源性膀胱、下尿路梗阻、間質性膀胱炎、下尿路腫瘤、泌尿系結石、不明原因的男女性尿頻)相伴發(fā)生。OAB病因不明,目前存在神經(jīng)源性和肌源性兩種學說,前者被廣泛接納但仍

2、有不能解釋的疑問,后者在近年來被廣泛關注。OAB的主要病理生理學改變是逼尿肌過度活動(detrusor overactivity,DO)。
　　鈣離子(Ca2+)是細胞內一種重要的無機陽離子,Ca2+參與了細胞的許多生理活動以及生理功能,在這其中,平滑肌的收縮性和興奮性的調節(jié)是一項重要作用。在鈣離子通道中,鈣庫調控的鈣離子通道(Store Operated Calcium Channels,SOCCs)參與了血管平滑肌、呼吸道平滑

3、肌的收縮和興奮的調控,進過論證,我們推測SOCCs可能在膀胱逼尿肌細胞的興奮性和收縮性的調節(jié)中發(fā)揮了重要作用,但是目前缺乏相關的證據(jù)。
　　因此,我們通過研究SOCCs在DO時的SD大鼠膀胱逼尿肌中的功能改變,探索SOCCs在OAB發(fā)生的機制和病理生理改變中的作用。
　　方法:
　　1.建立DO模型:取60只體質量為180-200g的雌性SD大鼠,其中30只作為對照組,其余30只行下尿路部分梗阻(partial bla

4、dder outlet obstruction,PBOO)手術,術后6周通過膀胱測壓法鑒定,選取其中出現(xiàn)不穩(wěn)定收縮的,即為DO模型,組成DO組;
　　2.膀胱逼尿肌離體肌條實驗:利用離體肌條牽拉實驗,采用SOCCs激動劑CPA和抑制劑SKF-96365干預,觀察SOCCs對膀胱逼尿肌離體肌條自發(fā)收縮情況(包括收縮頻率和收縮幅度)的影響,并對兩組的結果進行統(tǒng)計學比較;
　　3.全細胞膜片鉗實驗:通過2步法急性酶分離法分離得到膀

5、胱逼尿肌細胞,分離得到的逼尿肌細胞采用全細胞膜片鉗技術,觀察其SOCCs電流,并用其激動劑CPA和和抑制劑SKF-96365進行干預,觀察SOCCs電流的變化情況,并對兩組的結果進行統(tǒng)計學比較;
　　4.鈣負載實驗:通過1步法急性酶分離法分離的膀胱逼尿肌細胞,培養(yǎng)24h后,用Fluo-4AM熒光染色,用激光共聚焦顯微鏡觀察逼尿肌細胞內的鈣離子熒光,用CPA和SKF-96365進行干預,觀察細胞內鈣離子熒光變化情況,并對兩組的結果進

6、行統(tǒng)計學比較;
　　結果:
　　1.DO模型建立成功,通過膀胱測壓,30只進行PBOO手術的雌性SD大鼠有25只出現(xiàn)不穩(wěn)定收縮,成為DO模型大鼠;
　　2.膀胱逼尿肌離體肌條實驗提示,采用CPA激活SOCCs后,離體逼尿肌肌條自發(fā)收縮頻率加快,幅度降低,采用SKF-96365抑制SOCCs后,離體逼尿肌肌條自發(fā)收縮頻率減慢,幅度回升,DO組與對照組相比,其自發(fā)收縮頻率的變化有顯著差異(P<0.05),而收縮幅度的變化差

7、異不顯著;
　　3.全細胞膜片鉗實驗提示,成功分離大鼠膀胱逼尿肌細胞,并記錄到CPA可激發(fā)SOCCs電流,SKF-96365可使SOCCs電流降低,兩組組相比,DO組在+20mv和-80mv的電流密度顯著高于對照組(P<0.05);
　　4.鈣負載實驗提示:成功培養(yǎng)了原代膀胱逼尿肌細胞,利用激光共聚焦顯微鏡觀察可知CPA可增加細胞內的鈣離子濃度[Ca2+]i,SKF-96365可降低細胞內鈣離子濃度[Ca2+]i,兩組相比較