不同地區(qū)苜蓿假盤菌培養(yǎng)性狀研究和ISSR分子指紋分析.pdf

1、本文對來自不同地區(qū)的7個苜蓿假盤菌(Pseudopezizamedicaginis)進(jìn)行培養(yǎng)性狀的觀測和分析，并對其中的6個菌株進(jìn)行ISSR分子指紋分析，結(jié)果表明： 1.通過北京、甘肅、北疆、南疆、山西、內(nèi)蒙和寧夏7個苜蓿假盤菌菌株的分離培養(yǎng)，進(jìn)一步確認(rèn)離心稀釋法為分離假盤菌的較理想的方法，孢子彈射法能彈射出單孢但不能形成菌落。 2.通過觀測7個菌株的菌落直徑和生長速度，發(fā)現(xiàn)南疆菌株略有優(yōu)勢但并不與其他菌株表現(xiàn)出顯著差異

2、。其中北疆、南疆和內(nèi)蒙菌株產(chǎn)生子囊孢子，而其余各地均不產(chǎn)生，這可能是因為不同地理來源的菌株在產(chǎn)孢條件上有差異。從方差分析結(jié)果來看，內(nèi)蒙和南疆菌株在子囊盤和子囊孢子大小指標(biāo)上均表現(xiàn)出一致性；寧夏菌株在菌落直徑和菌落形成天數(shù)上均落后于其他菌株，他們之間差異達(dá)到顯著水平。 3.V-8碳酸鈣、V-8、V-8碳酸鈣苜蓿汁和V-8苜蓿汁4種培養(yǎng)基的比較試驗得出，V-8苜蓿汁為苜蓿假盤菌最適宜的培養(yǎng)基。并從菌株日生長速度來看，苜蓿汁主要在生長

3、中期發(fā)揮作用。 4.對3種方法提取DNA的純度進(jìn)行比較，結(jié)果表明：氯化芐法效果最佳，SDS-CTAB法次之，SDS法最差。 5.建立穩(wěn)定的苜蓿假盤菌ISSR-PCR擴增反應(yīng)體系和反應(yīng)程序：2μL10×buffer，dNTP0.2mM，MgCL22.0mM，Primer0.5mM，模板DNA100pg/μL，去離子甲酰胺2.5﹪，DNATaq酶1U，ddH2O12.1μL，共計20μL體系；94℃預(yù)變性4min，94℃變性

4、30s，58℃退火45s(-1℃/cycle)，72℃延伸2min，10個循環(huán)，94℃變性30s，48℃退火45s，72℃延伸2min，33個循環(huán)，72℃延伸5min，25℃保存。 6.ISSR-PCR擴增在苜蓿假盤菌中表現(xiàn)出高度多態(tài)性，從44個引物中篩選出22個具有多態(tài)性的引物，并得出AC、GAA、AG、GA、CA、CTC、ATG以及CT等2或3堿基的重復(fù)序列在苜蓿假盤菌中廣泛存在，均是首次得到證明。 7.對苜蓿假盤菌