在內(nèi)毒素導(dǎo)致的腦損傷過程中腦紅蛋白的表達(dá)變化及相關(guān)意義的研究.pdf

1、內(nèi)毒素休克在臨床上十分常見，目前對(duì)內(nèi)毒素腦損傷的研究主要針對(duì)內(nèi)毒素的損傷機(jī)制，而對(duì)內(nèi)毒素?fù)p傷過程的內(nèi)源性保護(hù)機(jī)制的相關(guān)研究卻鮮見報(bào)道。內(nèi)毒素（Lipopolysaccharide，LPS），是引發(fā)感染性腦損傷的主要因素。研究表明，在缺血缺氧等病理過程中，致病因子在引起腦損傷的同時(shí)會(huì)啟動(dòng)神經(jīng)元內(nèi)源性保護(hù)機(jī)制。腦紅蛋白（neuroglobin，Ngb）作為神經(jīng)元中最重要的攜氧蛋白和自由基的主要清除者，很可能參與此內(nèi)源性保護(hù)機(jī)制。為此本課題通

2、過復(fù)制內(nèi)毒素休克大鼠模型和內(nèi)毒素腦室注射腦損傷大鼠模型探討內(nèi)毒素所致腦損傷過程中大鼠腦紅蛋白（neuroglobin，Ngb）的表達(dá)變化及其意義，以期為內(nèi)毒素性腦損傷修復(fù)機(jī)制的研究和臨床干預(yù)性治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 第一部分：實(shí)驗(yàn)Ⅰ腦紅蛋白在內(nèi)毒素休克大鼠模型中的表達(dá)變化 方法：選用SD大鼠70只，隨機(jī)分為7個(gè)組（n=10）：1個(gè)對(duì)照組，經(jīng)尾靜脈注入0.5 mL生理鹽水；6個(gè)內(nèi)毒素干預(yù)組，采用經(jīng)大鼠尾靜脈注射0.5 mL革蘭

3、氏陰性菌胞壁脂多糖（0.016 g/kg體質(zhì)量）。對(duì)照組于注射生理鹽水后6h、內(nèi)毒素干預(yù)各組依分組分別于注射LPS后各時(shí)間段（3h，6h，12h，24h，48h，72h）收集血漿、腦脊液，并處死大鼠留取海馬和額葉皮質(zhì)。應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法、免疫印跡法和免疫組織化學(xué)法檢測標(biāo)本中Ngb含量，應(yīng)用干燥法檢測鼠腦含水量。 結(jié)果：①酶聯(lián)免疫吸附法顯示，注射內(nèi)毒素后額葉皮質(zhì)、海馬、腦脊液和血漿中Ngb含量顯著高于對(duì)照組（P<0.01），48

4、h達(dá)峰值。②免疫印跡法顯示實(shí)驗(yàn)各組均表達(dá)相對(duì)分子質(zhì)量約為17 kD的Ngb蛋白.內(nèi)毒素干預(yù)各組Ngb蛋白表達(dá)量顯著高于對(duì)照組，其中以3h組表達(dá)量最低，48h組和72 h組表達(dá)量最高。③Ngb免疫組化反應(yīng)陽性物質(zhì)主要位于錐體細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)，呈黃褐色。④注射內(nèi)毒素后，腦組織含水量明顯高于對(duì)照組（P<0.01），48 h含水量達(dá)峰值，為0.8313。 結(jié)論：Ngb表達(dá)量的上調(diào)與腦損害程度成正相關(guān)，且其過度表達(dá)是全身性的；Ngb表達(dá)量與內(nèi)

5、毒素處理的時(shí)程密切相關(guān)，Ngb表達(dá)上調(diào)可能是在內(nèi)毒素休克狀態(tài)下機(jī)體內(nèi)源性神經(jīng)保護(hù)機(jī)制之一。 第二部分：實(shí)驗(yàn)Ⅱ在內(nèi)毒素腦損傷大鼠模型中內(nèi)毒素劑量和作用時(shí)間對(duì)腦紅蛋白表達(dá)變化的影響 方法：按隨機(jī)單位組析因設(shè)計(jì)2個(gè)處理因素：即劑量因子（低劑量0.05 mg/kg LPS0.5 mL、中劑量0.1 mg/kg LPS0.5 mL、高劑量0.15mg/kg LPS0.5 mL）和3個(gè)水平（即時(shí)間因子：12h后檢測Ngb表達(dá)量、24

6、h后檢測Ngb表達(dá)量、48h后檢測Ngb表達(dá)量）的所有組合進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)研究。通過多功能科學(xué)計(jì)算器上的隨機(jī)數(shù)字發(fā)生器將90只實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分為9個(gè)內(nèi)毒素干預(yù)組。各組分別于注射內(nèi)毒素后相應(yīng)的12 h、24 h、48 h抽取頸靜脈血4 mL，小腦延髓池穿刺收集CSF2 ml，并處死大鼠留取海馬和額葉皮質(zhì)。應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法和免疫印跡法檢測標(biāo)本中Ngb含量。 結(jié)果：①酶聯(lián)免疫吸附法顯示，注射內(nèi)毒素后額葉皮質(zhì)和海馬中Ngb表達(dá)量隨劑量增加