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文檔簡介
1、目的:證實在小鼠食管發(fā)育過程中存在p75NTR的表達,且表達p75NTR的陽性細胞可能是小鼠食管上皮干細胞/祖細胞。
方法:1.在胎鼠發(fā)育過程中按照胎齡的先后,分階段獲取胎鼠食管。對獲得的食管進行多聚甲醛常規(guī)固定,石蠟包埋,制作石蠟切片。對于胎齡過小的胚胎,采取整體包埋。對于生后的小鼠食管,分離取出后再進行包埋。對切片進行HE染色,尋找每個發(fā)育階段的食管上皮;2.免疫組化Envision法檢測p75NTR、CK4和CK14在小
2、鼠胚胎11到18天、生后1到7天、生后2周、生后4周以及成年這些發(fā)育階段在食管上皮的表達及變化情況;3.共聚焦免疫熒光方法檢測p75NTR分別與CK4、CK14進行熒光雙標(biāo),觀察二者之間的共表達及變化情況。
結(jié)果:1.從HE染色的結(jié)果中,我們最早可以尋找到胚胎第11天的小鼠食管上皮。2.p75NTR蛋白在胚胎食管上皮中有表達,主要定位于食管上皮基底層的細胞膜或細胞漿中;CK4主要定位于食管上皮基底層以上的細胞漿中;CK14主要
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